HEP-53.4 Células de câncer de fígado em ratos

Informações básicas

Nome da célula：HEP-53.4 Células de câncer de fígado em ratos

Nome da célula：HEP-53.4 ; 53.4 ; Células de câncer de fígado de rato

Fonte celular：Alemanha

Identificação celular：Certificação STR aprovada

Forma celular：Células epiteliais, crescimento na parede

mídia de cultivo：DMEM (com NaHCO3 1,5 g/L) (BasMed-AW-013) + FBS 10% + P/S1%

Condições de cultivo：Fase gás: ar, 95%; CO2, 5%. Temperatura: 37 graus Celsius, umidade da bacia de cultivo de 70% -80%

Condições de congelamento：Liquido congelado sem sangue, armazenamento de nitrogênio líquido

Fundo celular：Os cânceres hepatocelulares primários derivados de camundongos C57BL/6J, que representam fielmente o câncer hepatocelular e fornecem modelos valiosos para o estudo deste tipo de câncer de fígado, são sinônimos de HEP-53.4 e 53.4, que são fáceis de identificar e cruzar, o câncer hepatocelular é um grande problema de saúde e essas células são capazes de realizar estudos precisos sobre suas vias moleculares, interações celulares e estratégias terapêuticas, que originam do Mus musculus (camundongos), fornecendo sistemas de modelos relevantes para a compreensão e o desenvolvimento de tratamentos para o câncer hepatocelular.

Utilização celular：Apenas para uso científico

Período de carga celular: no local, cerca de 1 semana

Atenção

1. Digestão regular coleta de células por centrifugação.

2. após a centrifugação, remover a limpeza interna do tubo centrífugo, adicionar cerca de 1 ml de células em suspensão para misturar, recomenda-se agitar suavemente ou soprar suavemente as células, colocar no recipiente para digerir as células e digerir por cerca de 1 min.

Após a digestão, use uma pistola de pipeta para soprar suavemente a suspensão celular para que o aglomerado se disperse e adicione rapidamente 3-5ml de meio de cultura contendo soro para terminar a digestão e remover por centrifugação.

4. Adicione cerca de 5ml de células no meio correspondente para misturar e proporcionalmente entrar na garrafa / prato de cultura.

Observar sob o microscópio para ver se as células são uniformemente dispersas em células únicas, se houver uma pequena quantidade de aglomerados de células pequenas que não precisam ser digeridas novamente, para que sejam colocadas na parede até que as células cresçam estáveis ​​e dissipam as células.

Envio a temperatura normal

Depois de receber a desinfecção da garrafa T25 e colocar a caixa de cultivo em posição por 2-3 horas após observar a densidade e o estado fotografar 2-3 comentários para a venda, a densidade pode ser transmitida. A proporção de transmissão pré-geração 1: 2, etc. é recomendado congelar uma garrafa inteira em um tubo de congelamento de 1 ml, e a outra garrafa continua a transmitir, congelando repetidamente 2-3 exemplares apenas depois de ampliar para fazer experimentos, a fim de evitar que as circunstâncias súbitas causem a ruptura.

Envio de gelo secoAs células convencionais enviam 2 tubos congelados, 1 recuperação, outro de reposição, a primeira recuperação não foi bem sucedida quando estritamente de acordo com os requisitos do fabricante para recuperar o segundo, nenhum caso de sucesso da recuperação imediatamente retir a foto de recuperação para nos notificar.

HEP-53.4 Células de câncer de fígado em ratos

Células de parede

1. Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

Adicionar 0,25% (w / v) 0,53 mM EDTA na garrafa de cultura (garrafa T25 1-2mL, garrafa T75 2-3mL), colocar em uma caixa de cultura de 37 ° C para digerir por 1-2 minutos (as células difíceis de digerir podem prolongar adequadamente o tempo de digestão), em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e cair, rapidamente recuperar a mesa de operação, bater alguns toques na garrafa de cultura e adicionar 3-4ml de meio contendo 10% FBS para terminar a digestão.

3. Subir suavemente, centrifugar 3-5min em 1000RPM, descartar o líquido superior, adicionar 1-2mL de líquido de cultura e soprar bem. Divida a suspensão celular na proporção 1: 2 em uma nova garrafa T25 / placa de Petri de 6 cm, adicione 6-8 ml de novo meio de cultura configurado de acordo com as instruções para manter a vitalidade do crescimento das células, e a transmissão subsequente é realizada na proporção 1: 2 ~ 1: 5 de acordo com as circunstâncias reais.

Congelação celular: após a recepção das células, é recomendado congelar um lote de sementes celulares durante a cultura das primeiras 3 gerações para uso experimental posterior.

O meio de cultura para transporte (meio de irrigação) não pode mais ser usado para cultivar células, por favor, substitua o meio de cultura recém-formulado de acordo com as condições de cultura celular do manual para cultivar células.

Células suspensas

As células que crescem em suspensão podem manter o estado de crescimento das células adicionando meio à garrafa de cultura, em geral, a densidade celular é mantida em 1 x 105 ~ 1 x 106 peças / mL (diferentes células exigem densidade diferente) para manter o crescimento normal das células. Se necessário, a garrafa pode coletar a suspensão celular em um tubo de centrifugação de 1000 rpm, centrifugar 5min, descartar a limpeza superior, adicionar 1-2mL de cultura depois de ressuspender e misturar a suspensão celular em uma proporção de 1: 2 para a nova garrafa T25, adicionar 6-8ml de acordo com as instruções do novo meio de cultura configurado para manter a vitalidade do crescimento das células, a transmissão posterior é realizada de acordo com as circunstâncias reais na proporção de 1: 2 ~ 1: 4.

Forma de transporte

Temperatura baixa: embalagem de gelo seco do tubo de congelamento de 1mL para o transporte, após a recepção do frigorífico de -80 graus para conservar durante a noite para transferir para o nitrogênio líquido ou recuperação direta, se o gelo seco for descoberto volátil e limpo, a tampa da garrafa do tubo de congelamento caiu, quebrou e as células estão contaminadas, entre em contato conosco imediatamente.

Temperatura normal: T25 frasco de recuperação das células sobreviventes é enviado a temperatura normal, após a recepção, de acordo com o tratamento após a recepção das células.

Segurança Biológica

Todas as células animais são consideradas potencialmente biológicamente perigosas e devem ser operadas dentro de um banco de biossegurança de nível secundário, com cuidado, todos os resíduos e utensílios que entraram em contato com a célula devem ser esterilizados antes de serem descartados.

Recomenda-se sempre usar luvas de proteção, roupas e máscaras de proteção durante a recuperação de células congeladas. Observação: O tubo de congelamento submerso em nitrogênio líquido vai vazar e vai lentamente encher o nitrogênio líquido. Quando descongelado, a fase de conversão de nitrogênio líquido em gás pode fazer com que o recipiente exploda ou sopra a tampa com força perigosa, gerando detritos volantes que causam danos pessoais.

Atenção especial

A célula cresce bem em DMEM (contendo 1,5 g / LNaHCO3) e a maioria dos DMEM contém concentrações mais altas de NaHCO3 (3,7 g / L), o que requer uma maior concentração de CO2 (7% -10%) quando as células são cultivadas com DMEM (3,7 g / L NaHCO3).