Especificações do kit de extração e purificação de ácido nucleico de RNA

Características Vantagens:

1.Especificação: Todos os primeiros produtos utilizados foram submetidos a uma análise bioinformática detalhada eGenBankE a comparação de um banco de dados enorme construído por si mesmo, para garantir que cada precursor usado seja uma sequência genética específica de gênero ou serotipo, que pode alcançar a detecção específica de gêneros bacterianos e serotipos, a especificidade é alcançadaBom - É.

2. Reprodutividade: Todos os produtos da série foram validados por um grande número de cepas experimentaisBom - É.

3. Sensibilidade: Esta série de produtos permite a detecção de bactérias altamente sensíveis quando a concentração de bactérias na amostra é atingida.103cfu/mlPode ser realizada a sua detecção direta, sem a necessidade de um processo de sterilização complicado.

4. Utilidade: ampla gama de testes que abrangem perigos mais graves para o corpo humano17Bactérias patogênicas das vias respiratórias e intestinais, que permitem a detecção rápida de amostras clínicas e outras amostras ambientais3-4Uma hora.

5. Vantagens1A sequência é rica em recursos, excetoGenBankAlém das sequências publicadas, a empresa também decodificou sequências de uma grande quantidade de cepas, garantindo, em teoria, a boa conservação e especificidade dos primeiros selecionados.

6. Vantagens2Esta série de kits de teste foi validada por um grande número de experimentos conservadores e específicos, com os ricos recursos bacterianos da empresa, cada kit de teste passou20Validação conservadora de cepas padrão residuais e cepas clínicas e40Validação de especificidade para as cepas padrão e as cepas clínicas para garantir que nenhum resultado falso positivo ou falso negativo seja relatado durante o uso.

Passos de extração:

1. retirar a amostra do frigorífico negativo oitenta e colocar no gelo para descongelar lentamente; (Centrífuga pré-refrigerada até 4 graus)

Depois de descongelar (vermelho), adicionar 200 μl de cloroformo (adicionar 1/5 do volume de cloroformo do volume de Trizol), agitar fortemente (vermelho lactoso) e deixar no gelo por 10 min. (O cloroformo é um solvente orgânico que faz com que a fase orgânica e inorgânica se separem rapidamente. A fase orgânica é principalmente ligada ao fenol e à proteína, o que faz com que a proteína e o RNA se separem e o RNA entre na fase aquática.) ）

3. colocado em uma centrífuga pré-refrigerada, centrífuga (4 graus, 12.000 rpm, 15 min), após a centrífuga é visível claramente dividido em três camadas (a camada superior incolor transparente é a camada de RNA, a camada inferior é a camada de proteína é a camada vermelha).

4. cuidadosamente aspirar lentamente a limpeza superior, cerca de 400 μl (prefere aspirar menos, não aspirar mais), colocar em outro novo tubo EP livre de RNase de 1,5 ml, adicionar o volume de isopropanol, misturar para cima e para baixo, colocar em reposo a temperatura normal por 15 min.

Centrífuga (4 graus, 12.000 rpm, 15 min), precipitação branca visível (às vezes as células menos visíveis do precipitado, pode ser colocado por -20 ou -82 horas e continuar com os passos seguintes)

Deixe fora a limpeza superior, adicione 950 ul de etanol 75% a cada tubo e misture para cima e para baixo (lembre-se de não bater com uma pistola, isso causará a dissolução do RNA).

Centrífuga (4 graus, 12.000 rpm, 10 min), precipitação claramente branca no fundo visível.

Depois da centrifugação, descarte a limpeza superior, coloque a centrifugadora novamente para separar, lave o líquido residual com um pipete de 10 μl e abra a tampa para secar (cerca de 5 min).

Cada amostra de acordo com o tamanho do precipitado adicionar a quantidade apropriada de água DEPC (geralmente 20 ~ 30 μl, às vezes o precipitado não é visível, pode adicionar 10 μl de DEPC dissolvido em água), soprar o RNA dissolvido, concentração de medição enzimática do 11º andar, marcação de OD (260/280 = 1,8-2,0), preservação de oitenta negativos.

Nota: Para extração de neutrófilosRNA sugere um número de células maior que 2x106/amostra;

ObservaçãoUsar máscara durante a operação.

Cinco elementos da reação PCR:
ParticiparExistem cinco tipos de substâncias para a reação de PCR: iniciadores, enzimas, dNTP、 Modelos e Mg2+
Primário:Os primeiros são essenciais para a resposta específica da PCR, e a especificidade dos produtos da PCR depende do grau em que os primeiros são complementares ao DNA do modelo. Em teoria, basta conhecer qualquer sequência de DNA modelo para iniciar uma cadeia de oligonucleótidos complementar de acordo com o seu projeto, o uso de PCR pode ampliar significativamente o DNA modelo in vitro.
O desenho de introdutores deve seguir os seguintes princípios:
① comprimento do introdutor: 15-30bp, comumente usado em torno de 20bp.
② Expansão de expansão de precursor: 200-500bp é apropriado, em condições específicas, o segmento pode crescer até 10kb.
Base: o conteúdo de G + C é apropriado para 40-60%, o efeito de amplificação de G + C é muito pouco e G + C é muito propenso a aparecer faixas não específicas. O ATGC é bem distribuído aleatoriamente, evitando uma sequência de mais de cinco nucleótidos de purina ou pirimidina.
Evite a aparição de estruturas secundárias dentro dos primeiros, evitando a complementaridade entre os dois primeiros, especialmente a complementaridade da extremidade 3 ', caso contrário, formará um dímero de primeiros, gerando uma faixa de amplificação não específica.
A base da extremidade 3’ do início, especialmente a base final e a base inversa, deve ser emparelhada estritamente para evitar falhas de PCR devido ao não emparelhamento da base final.
Existem ou podem ser adicionados pontos de corte enzimático apropriados no precursor, e a sequência alvo amplificada tem pontos de corte enzimático apropriados, o que é muito benéfico para a análise de corte enzimático ou clonagem molecular.
Especificação do precursor: o precursor não deve ser claramente homogênico com outras sequências do banco de dados de sequências de ácidos nucleicos.

Atenção:

A caixa de reagente deve ser retirada do ambiente refrigerado após o equilíbrio de temperatura ambiente de 15 a 30 minutos, o pacote de marcação enzimática deve ser guardado no saco selado após a abertura da placa, se não estiver acabada. O líquido de lavagem concentrado pode ser cristalizado, diluído pode ser aquecido no banho de água e não afeta o resultado durante a lavagem.

Cada etapa de amostragem deve usar um amostrador e regularmente corrigir sua precisão para evitar erros de teste. O tempo de amostragem é controlado dentro de 5 minutos, se o número de amostras for grande, recomenda-se o uso de amostragem de pistola.

Por favor, faça a curva padrão ao mesmo tempo em cada medição，Faça um buraco. Se o teor de substância a ser testada na amostra for elevado demais (amostraO valor de OD é maior do que o valor de OD de um poço padrão di), por favor, dilua primeiro um certo múltiplo (n vezes) com o diluído da amostra e depois determine, no cálculo, por favorde novoMultiplicando o múltiplo de diluição total (x n x 5).

A membrana de vedação é limitada a um uso único para evitar a poluição cruzada.

5. Mantenha o substrato à luz.

6. estritamente de acordo com as instruções de operação, o resultado do teste deve ser determinado com base nas leituras enzimáticas.

Todas as amostras, líquidos de lavagem e vários resíduos devem ser tratados como infecciosos.

Os diferentes componentes do lote deste reagente não devem ser misturados.

Não é possível usar produtos expirados.

10. Se for diferente do manual em inglês, prevalecerá o manual em inglês.

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