Kit de teste MTT

Parâmetros do produto:

O MTT é amplamente utilizado para detectar o crescimento celular, pelo princípio de que o MTT pode ser cristalizado em formazano roxo escuro pela redução de desidratase nas mitocôndrias de células vivas, enquanto as células mortas não têm essa atividade. Depois que o cristal de formazano roxo escuro é dissolvido, sua concentração pode ser determinada medindo a absorção de luz de 490 nm de comprimento de onda, e deduzindo assim a vitalidade da célula, quanto mais intensa a proliferação celular, maior a absorção de luz; Quanto maior a citotoxicidade, menor a absorção de luz.

Detalhes do produto:

Relatório experimental:

Separação e cultivo:

1, sob condições estériles, remova o tecido atrial de ratos SD de idade 1-3d, em seguida, use PBS para limpar este bloco de tecido 2 vezes e, finalmente, corte o tecido em cerca de 1mm3 de tamanho;

2, adicionar 4 mL de digestão enzimática (0,1% e 0,1% de colágenase tipo I) ao bloco de tecido, misturar 10s, colocar a digestão em 37 ° C para 10 min, em seguida, soprar com uma goteira para fazer uma suspensão unicelular, precipitar naturalmente e coletar a limpeza, colocar em 4 ° C após a terminação da digestão com um meio que contém 10% FBS;

3, o tecido restante adicionar 3-4mL de líquido digestivo enzimático, misturar 10s, colocar 37 ° C após a digestão 10 min, de acordo com o método acima recolher o limpo e terminar a digestão após a colocação 4 ° C, repetir esta etapa 2-3 vezes até que o tecido * é digerido;

4, filtre a digestão celular com uma tela de aço inoxidável de 200 meshes, centrífuga de 1200r / min para 10min, descarte a limpeza superior, as células de precipitação são misturadas com um meio de cultura que contém 10% de FBS DMEM / F12, vacinadas em garrafas de cultura de 25 cm2, colocadas em 37 ° C, 5% de CO2 em uma caixa de cultura;

5, após a diferença de adesão à parede 1h, aspirar o meio de cultura, de acordo com a necessidade experimental de vacinação na placa de 6 buracos para continuar a cultivar;

Identificação de imunofluorescência:

1, espera que as células do músculo atrial cresçam até 80% de fusão, descartar o meio de cultura, lavar as células com PBS de crescimento térmico 2 vezes, cada vez por 10 minutos, e, em seguida, fixar as células com poliformaldeído de 4% a temperatura ambiente por 15 minutos;

2, PBS lavar as células 2 vezes, cada vez por 10 min, em seguida, em condições de 4 ° C, com 0,1% Triton X-100 permeabilidade por 15 min;

3, PBS lavar as células 2 vezes, cada vez por 10min, em seguida, em condições de temperatura ambiente, com 4% BSA para fechar as células por 30min;

Dilue a alfa-actina em proporção de 1: 100 e coloque-a no frigorífico de 4 ° C para incubar as células durante a noite;

5, PBS lavar as células 3 vezes, 10min cada vez, diluir a resistência anti-alfa-actina em proporção de 1: 150, colocar 1h em condições de 37 ° C;

Lave com PBS 3 vezes, cada vez por 10 minutos, e finalmente observe a imagem sob o microscópio fluorescente invertido e tire uma foto.

Etapas de treinamento:

1. Use uma pinça de tampa para remover o vidro da tampa de 75% de etanol, limpe com um pano de seda estéril, não use um pano;

Coloque suavemente o vidro da tampa em uma placa de cultivo de 6 buracos (uma peça por buraco) ou um prato de petri (2-3 peças por prato plano);

2-3 horas a uma distância de 20-30 centímetros da luz UV;

4. mover a suspensão celular contada para a placa de cultura para que a tampa * seja mergulhada no líquido de cultura;

A placa de cultura é incubada em uma incubadora de banho de água de 5% de CO2 por 37 ° C por 2-3 dias, quando as células adesivas crescem até cobrir 2/3 da área inferior da placa de cultura, a placa de cultura é removida, a tampa é removida suavemente com uma pinça de tampa, depois de lavar com água destilada, a fixação rápida e o teste imunocitoquímico podem ser feitos.

Pontos e descrições do experimento:

Este método é aplicável à cultura celular de parede, e não é aplicável à cultura celular em suspensão, as células em suspensão podem usar o método de gotejamento;

2. o vidro usado deve ser de vidro de alta qualidade e tratado com lavagem de ácido cromático;

3. o slide da tampa é muito fino e frágil, o movimento é leve ao tirar o slide da tampa;

Se for necessário mais células de crescimento consistente, um prato de petri maior pode ser usado, mas não deve ser muito grande para evitar o desperdício de líquido de cultura e aumentar a probabilidade de poluição;

Se a capacidade de crescimento da parede celular é pobre, a tampa pode ser mergulhada em uma solução de polilisina de 0,5% por 5 a 10 minutos e secada naturalmente.

Pontos de operação:

1) pré-aquecer o meio em uma panela de banho de água de 37 ℃; Prepare um tubo centrífugo estéril de 15 ml e adicione 8 ml de meio pré-aquecido.

2) Remova as células congeladas do tanque de nitrogênio líquido e coloque-as rapidamente na panela de banho de água de 37 ° C para reaquecer (você pode preparar um copo limpo, encher a água de 37 ° C, depois de remover o tubo de congelamento celular, coloque-o rapidamente no copo e depois transfera-o gradualmente para a panela de banho de água). Agite suavemente o tubo de congelamento para que as células possam descongelar em 1 a 2 minutos * para que as células possam passar o mais rápido possível pelo segmento de temperatura mais vulnerável (-5 a 0 ° C). Observe que a abertura do tubo congelado não pode ser submetida à água, BRL (células hepáticas de rato) para evitar a contaminação.

3) limpe o tubo de congelamento com 75% de álcool e coloque-o na mesa ultra-limpa, transfera as células do tubo para o tubo centrífugo pronto, sopra suavemente o líquido para que as células se dispersem uniformemente, reduza a concentração de DMSO e evite a produção de bolhas ao soprar. Lave a parede do tubo duas vezes com meio fresco e transfira-a para dentro do tubo centrífugo.

4) 800rpm centrífuga 5min, descartar a limpeza, adicionar o meio fresco, soprar para fazer uma suspensão celular.

5) Transferir a suspensão celular para a garrafa de células T25, adicionar a quantidade apropriada de meio de cultura, agitar suavemente a garrafa de células para que as células sejam distribuídas uniformemente e colocar a cultura no caixa quente.

6) No dia seguinte, observe o crescimento celular e troce o meio fresco para remover as células mortas. Continue a cultivar, até que as células cresçam até 80-90% de convergência para transmitir normalmente. Geralmente, as células recém-recuperadas precisam passar por 2 a 3 gerações, após a recuperação da vitalidade celular para realizar experimentos de seguimento.

Anticorpos do inibidor da enzima de conversão da angiotensina 1

Anticorpos contra o fator de transcrição da apoptose

α-1 anti-pâncer

Anticorpos da família 6 de proteínas ligadas ao ATP

Anticorpos G1 da subfamília de ligação ao trifosfato de adenosina

Anticorpos do receptor lipidino 2

Anticorpos à proteína ANGEL1

Anticorpos à proteína ANGEL2

Anticorpos à proteína ANKLE2

Anticorpos específicos da proteína âncora testicular 1

Anticorpos de domínio repetido da proteína âncora proteína 13B

Anticorpos de domínio repetido da proteína âncora 20A1

Anticorpos de domínio repetido da proteína âncora 20A3

Anticorpos da proteína 22 do domínio repetido da proteína âncora

Anticorpos de domínio duplicado da proteína âncora Proteina 50

BC-020 (células humanas de câncer de mama) 5 x 106 células / garrafa x 2

BC-021 (células humanas de câncer de mama) 5 x 106 células / garrafa x 2

BC-022 (células humanas de câncer de mama) 5 x 106 células / garrafa x 2

BE(2)-M17 (células de neuroblastoma humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

BGC-803 (células de câncer de estômago humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

C918 (células de melanoma retinal humano) 5×106 células/frasco×2

CAL-27 (células de câncer da língua humana) 5 x 106 células / garrafa x 2

LS 180 (células humanas de câncer de glândula cólon) 5 x 106 células / garrafa x 2

CNE-2Z (células de câncer nasal-faringial humana) 5 x 106 células / garrafa x 2

Kit de teste MTTCOLO 201 (células humanas de câncer de ganglion coloretal) 5 x 106 células / garrafa x 2

CW-2 (células de câncer de cólon humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

CRT (células de glioma humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

D283 Med (células de mieloblastoma cerebral humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

EA.hy926 (células de fusão de células da veia umbilical humana) 5 x 106 células / garrafa x 2

ECV-304 (células endoteliais da veia umbilical humana) 5 x 106 células / garrafa x 2

EJ (células de câncer da bexiga humana) 5 x 106 células / garrafa x 2

H-97 (células de câncer de fígado humanas altamente metastasizadas) 5 x 106 células / garrafa x 2