Kit de teste de proliferação celular e citotoxicidade MTS

Nome em chinês:Kit de teste de proliferação celular e citotoxicidade MTS

Kit de detecção de proliferação celular e citotoxicidade MTS

Especificações do produto: 500 vezes
Número do produto: BJ-01X6321

O MTS é um novo tipo de composto metálico que pertence ao MTT como um derivado do tetrazolazo. O MTS pode ser degradado pela deshidrogenase mitocondrial nas células vivas para produzir a mola amarela-marrom solúvel em água, através da medição da absorção espectral da mola, que pode determinar a proliferação celular.

Procedimento de operação de cultura celular:
Preparação de meios de cultivo e condições de congelamento:
1) Preparação do meio de cultura F-12K; Sério bovino de alta qualidade, 10%; Dupla resistência, 1%.
2) Condições de cultivo: fase gás: ar, 95%; CO2, 5%. Temperatura: 37 ° C, umidade da bacia de cultivo de 70% -80%.
3) Liquido congelado: 90% soro, 10% DMSO, disponível atualmente.
Tratamento celular:
1) Células de recuperação: colocar rapidamente o tubo de congelamento contendo 1 ml de suspensão celular em banho de água de 37 ° C (a superfície da água deve estar abaixo da tampa do tubo de congelamento) agitar para descongelar, mover-se em um tubo centrífugo de 15 ml pré-preparado contendo 4 ml de meio de cultura e misturar uniformemente. Centrifugar em 1000RPM por 4 minutos, descartar o líquido e adicionar 1mL de meio para soprar bem. Em seguida, toda a suspensão celular é transferida para a cultura durante a noite em uma garrafa com meio de cultura de 5 ml. No dia seguinte, troce o líquido e verifique a densidade celular.
2) Transferência celular: se a densidade celular chegar a 80% -90%, a cultura de transmissão pode ser realizada.

Métodos de cultura celular:
Transmissão celular: quando a densidade celular atinge 80-90%
① descartar a cultura de limpeza superior, limpar com PBS ou água salina fisiológica 1-2 vezes;
② Adicionar 2 ml 0,25% (garrafa T25), para cobrir toda a garrafa ou prato, tampa bem colocado na caixa de cultivo para a digestão;
②1-2min depois, observar as células sob o microscópio, se a maioria das células se retrair e uma pequena quantidade de células cair, suavemente soprar abaixo para confirmar a digestão após a adição de * meio de cultura para terminar a digestão; Se as células ainda estiverem ligadas à parede, coloque-as de volta no recipiente para continuar a digerir até que possam ser sopradas suavemente;
② Centrifugar a suspensão celular em condições de cerca de 1000RPM em 4min, descartar o limpo;
② adicionar uma garrafa de cultura ou prato com meio fresco em suspensão, garrafa de cultura T25 adicionar meio de cultura de 6-8ml;
As células em suspensão são coletadas por centrifugação direta e as células são divididas em novas garrafas de cultura após a precipitação.
2 – Recuperação celular:
① derreter rapidamente o tubo de congelamento em água quente de 37 ° C, tempo de cerca de 1 min, adicionar 4-5ml de meio de cultura para misturar.
② Centrífuga em cerca de 1000RPM em condições de 4min, descarte a limpeza, acrescente 1-2ml de meio de cultura para soprar bem, adicione a suspensão celular à garrafa de cultura e adicione a quantidade apropriada de meio de cultura.
Congelação celular: preservação de células congeladas quando o crescimento celular for bom
① Eliminar a cultura, limpar 1-2 vezes com PBS ou água salina fisiológica, adicionar 1 mL de 0,25% (garrafa T25)
② Depois de 1-2min, observar as células sob o microscópio, a maioria das células se retrai e uma pequena quantidade de células cai, suavemente soprar para baixo para confirmar a digestão após a adição * meio de cultura para terminar a digestão;
② Suspendência celular sob condições de cerca de 1000RPM centrifugar 4min, descartar a limpeza, adicionar 1ml de líquido congelado para ressuspender as células;
② Coloque o tubo de congelamento na caixa de arrefecimento do programa, coloque-o no frigorífico de -80 ℃, depois de 4 horas, transfira o tubo de congelamento para o tanque de nitrogênio líquido para armazenamento.

TM3 (células interplasmáticas do testículo do rato) 5 x 106 células / garrafa x 2

TSCCa (células de câncer da língua humana) 5 x 106 células / garrafa x 2

U-2 OS (células de sarcoma ósseo humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

U251 (células de glioma humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

U-87 MG (células de glioma humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

U-937 (células de linfoma de células de tecido humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

V79 (células pulmonares de hamster) 5 x 106 células/garrafa x 2

VCaP (células humanas de câncer de próstata) 5 x 106 células / garrafa x 2

Vero (células renais de macaco verde africano) 5 x 106 células / garrafa x 2

WI-38 (células pulmonares embrionárias humanas) 5 x 106 células / garrafa x 2

Desejo (células da membrana humana) 5 x 106 células / garrafa x 2

Y1(Y-1) (células do córtex adrenal do rato) 5 x 106 células/garrafa x 2

YAC-1 (linfoma de rato) 5 x 106 células / garrafa x 2

ZR-75-1 (células humanas de câncer de mama) 5 x 106 células / garrafa x 2

ZR-75-30 (células humanas de câncer de mama) 5 x 106 células / garrafa x 2

16HBE (células epiteliais bronquiais humanas) 5 x 106 células / garrafa x 2

801-D (células de câncer de pulmão de células gigantes humanas) 5 x 106 células / garrafa x 2

A2 (células cancerosas humanas) 5 x 106 células / garrafa x 2

A-427 (células de câncer de pulmão humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

A-498 (células de câncer renal humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

A875 (melanoma humano) 5 x 106 células / garrafa x 2

Anticorpos da proteína alfa/beta hidrolisase pulmonar 3

Anticorpos da subunidade 3 da transportadora de caixa de ligação de adenosina trifosfato F

Anticorpos da subunidade 5 da transportadora de caixa de ligação de adenosina trifosfato A

Anticorpos à proteína ADCK1

Anticorpos do domínio de ligação acil à proteína 4

Anticorpos alfa/beta hidrolisase 4

Anticorpos à proteína ADCK2

Anticorpos A1 da família Acetaldehidrogenase 16

Anticorpos ligados à proteína 3 do domínio molecular IgG

Anticorpos de etanol deshidrogenase 1

Anticorpos de delta-aminoacetil propionato desidratase

Anticorpos da proteína 4 associada à esclerose muscular lateral

Anticorpos de globulina α2

Anticorpos à proteína ACCSL

Anticorpos de proteína alfa fetal

Anticorpos ligados à proteína beta-amiloide precursor proteína 3

Anticorpos de Actina Astral

Anticorpo à proteína TREX1 associada ao lúpus macular sistêmico

Anticorpos fosforificados sistêmicos contra a proteína primordial TREX1 do lúpus macular vermelho

Anticorpos fosforilados da proteína TREX1 associada ao lúpus macular sistêmico

Kit de teste de proliferação celular e citotoxicidade MTSAnticorpos de cadeia 1 do complexo de proteína AP-2μChain

Anticorpos da cadeia 1 do complexo de proteínas associadas à junção fosforilada AP-2μm

Anticorpos de membrana 7

Procedimentos operacionais
1, na placa de 96 buracos adicionar células 100 μL / buraco, geralmente a experiência de proliferação celular adicionar 100 microlitros de 2.000 células por buraco, a experiência de citotoxicidade adicionar 100 microlitros de 5.000 a 10.000 células por buraco (número específico de células usadas por buraco, de acordo com o tamanho da célula, velocidade de proliferação celular rápida e lenta). Coloque a cultura celular de 5% CO2 a 37 ° C por 24 horas.
2. Adicione 0 a 10 μL do composto testado em concentrações apropriadas.
Incubar a placa de 96 buracos a 37 ° C, contendo 5% de ar de CO2 e 100% de umidade em um compartimento de cultura celular durante o tempo apropriado.
Diluir 5 x MTT com um diluído em 1 x solução de MTT.
5, cada poço adicionar 50 μL de 1 x solução de MTT, incubar a 37 ° C por 4 horas, para que o MTT é reduzido a molybdenum.
6, aspirar o líquido superior, adicionar 150 μL de DMSO a cada orifício para dissolver o molybdenum e agitar bem com a cama de agitação plana.
O calibrador enzimático detecta a densidade óptica de cada buraco no comprimento de onda de 570 nm (por exemplo, sem filtro de 570 nm, um filtro de 560-600 nm pode ser usado).
8 - Análise dos resultados
a、 Taxa de sobrevivência celular: subtração do valor de OD de cada poro de teste do valor de OD de base (* mídia mais MTT, sem células) ou valor de OD de poro de fármaco vazio (* mídia mais diluição diferente da droga em teste mais MTT, sem células), o valor de OD de cada poro repetido é a média ± SD. A taxa de sobrevivência celular é expressa em T / C%, T é o valor de OD da célula administrada e C é o valor de OD da célula de controle. % de sobrevivência celular = (OD da célula administrada / OD da célula de controle) × 100
b、 Determinar a concentração de fármaco em T/C = 50% (IC50) e a concentração de fármaco em T/C = 10% (IC90)