Marcas de kits de extração e purificação de ácidos nucleicos

Características Vantagens:

1.Especificação: Todos os primeiros produtos utilizados foram submetidos a uma análise bioinformática detalhada eGenBankE a comparação de um banco de dados enorme construído por si mesmo, para garantir que cada precursor usado seja uma sequência genética específica de gênero ou serotipo, que pode alcançar a detecção específica de gêneros bacterianos e serotipos, a especificidade é alcançadaBom - É.

2.Reprodutividade: Todos os produtos da série foram validados por um grande número de cepas experimentaisBom - É.

3.Sensibilidade: Esta série de produtos permite a detecção de bactérias altamente sensíveis quando a concentração de bactérias na amostra é atingida.103cfu/mlPode ser realizada a sua detecção direta, sem a necessidade de um processo de sterilização complicado.

4.Utilidade: ampla gama de testes que abrangem perigos mais graves para o corpo humano17Bactérias patogênicas das vias respiratórias e intestinais, que permitem a detecção rápida de amostras clínicas e outras amostras ambientais3-4Uma hora.

5.Vantagens1A sequência é rica em recursos, excetoGenBankAlém das sequências publicadas, a empresa também decodificou sequências de uma grande quantidade de cepas, garantindo, em teoria, a boa conservação e especificidade dos primeiros selecionados.

6.Vantagens2Esta série de kits de teste foi validada por um grande número de experimentos conservadores e específicos, com os ricos recursos bacterianos da empresa, cada kit de teste passou20Validação conservadora de cepas padrão residuais e cepas clínicas e40Validação de especificidade para as cepas padrão e as cepas clínicas para garantir que nenhum resultado falso positivo ou falso negativo seja relatado durante o uso.

Extração de RNA e DNA:

Cracking: a fórmula de cracking pode ser devido a você querer extrair O DNA ainda difere do RNA, mas o que é comum é o tampão de fissão que contém altas concentrações de sal desliquefeito.

Efeito de Chaotropes (desliqueantes): Chaotropes interrompem a interação entre ligações de hidrogênio e hidrofóbios. Os sais desliqueados incluem cloridrato de guamina, tianato de guamina, úrea e clorato de lítio.

Detergente: Além do deslíquidante, o tampão de fissura geralmente contém algum descontaminante para ajudar a dissolver e fissar as proteínas.

溶junhoEnzimas e protease K: Dependendo do tipo de amostra, também é possível usar enzimas para a fissura. A protease K é uma delas e, na verdade, funciona melhor nesses tampões de degeneração; Quando a proteína aumenta, a protease K também aumenta. No entanto, a soluçãojunhoAs enzimas não atuam na degeneração e, portanto, são solúveisjunhoO tratamento enzimático é geralmente realizado antes da adição de sal degenerado.

Passos de extração:

1. retirar a amostra do frigorífico negativo oitenta e colocar no gelo para descongelar lentamente; (Centrífuga pré-refrigerada até 4 graus)

Depois de descongelar (vermelho), adicionar 200 μl de cloroformo (adicionar 1/5 do volume de cloroformo do volume de Trizol), agitar fortemente (vermelho lactoso) e deixar no gelo por 10 min. (O cloroformo é um solvente orgânico que faz com que a fase orgânica e inorgânica se separem rapidamente. A fase orgânica é principalmente ligada ao fenol e à proteína, o que faz com que a proteína e o RNA se separem e o RNA entre na fase aquática.) ）

3. colocado em uma centrífuga pré-refrigerada, centrífuga (4 graus, 12.000 rpm, 15 min), após a centrífuga é visível claramente dividido em três camadas (a camada superior incolor transparente é a camada de RNA, a camada inferior é a camada de proteína é a camada vermelha).

4. cuidadosamente aspirar lentamente a limpeza superior, cerca de 400 μl (prefere aspirar menos, não aspirar mais), colocar em outro novo tubo EP livre de RNase de 1,5 ml, adicionar o volume de isopropanol, misturar para cima e para baixo, colocar em reposo a temperatura normal por 15 min.

Centrífuga (4 graus, 12.000 rpm, 15 min), precipitação branca visível (às vezes as células menos visíveis do precipitado, pode ser colocado por -20 ou -82 horas e continuar com os passos seguintes)

Deixe fora a limpeza superior, adicione 950 ul de etanol 75% a cada tubo e misture para cima e para baixo (lembre-se de não bater com uma pistola, isso causará a dissolução do RNA).

Centrífuga (4 graus, 12.000 rpm, 10 min), precipitação claramente branca no fundo visível.

Depois da centrifugação, descarte a limpeza superior, coloque a centrifugadora novamente para separar, lave o líquido residual com um pipete de 10 μl e abra a tampa para secar (cerca de 5 min).

Cada amostra de acordo com o tamanho do precipitado adicionar a quantidade apropriada de água DEPC (geralmente 20 ~ 30 μl, às vezes o precipitado não é visível, pode adicionar 10 μl de DEPC dissolvido em água), soprar o RNA dissolvido, concentração de medição enzimática do 11º andar, marcação de OD (260/280 = 1,8-2,0), preservação de oitenta negativos.

Nota: Para extração de neutrófilosRNA sugere um número de células maior que 2x106/amostra;

ObservaçãoUsar máscara durante a operação.

O desenho de introdutores deve seguir os seguintes princípios:
① comprimento do introdutor: 15-30bp, comumente usado em torno de 20bp.
② Expansão de expansão de precursor: 200-500bp é apropriado, em condições específicas, o segmento pode crescer até 10kb.
Base: o conteúdo de G + C é apropriado para 40-60%, o efeito de amplificação de G + C é muito pouco e G + C é muito propenso a aparecer faixas não específicas. O ATGC é bem distribuído aleatoriamente, evitando uma sequência de mais de cinco nucleótidos de purina ou pirimidina.
Evite a aparição de estruturas secundárias dentro dos primeiros, evitando a complementaridade entre os dois primeiros, especialmente a complementaridade da extremidade 3 ', caso contrário, formará um dímero de primeiros, gerando uma faixa de amplificação não específica.
A base da extremidade 3’ do início, especialmente a base final e a base inversa, deve ser emparelhada estritamente para evitar falhas de PCR devido ao não emparelhamento da base final.
Existem ou podem ser adicionados pontos de corte enzimático apropriados no precursor, e a sequência alvo amplificada tem pontos de corte enzimático apropriados, o que é muito benéfico para a análise de corte enzimático ou clonagem molecular.
Especificação do precursor: o precursor não deve ser claramente homogênico com outras sequências do banco de dados de sequências de ácidos nucleicos.

Atenção:

A caixa de reagente deve ser retirada do ambiente refrigerado após o equilíbrio de temperatura ambiente de 15 a 30 minutos, o pacote de marcação enzimática deve ser guardado no saco selado após a abertura da placa, se não estiver acabada. O líquido de lavagem concentrado pode ser cristalizado, diluído pode ser aquecido no banho de água e não afeta o resultado durante a lavagem.

Cada etapa de amostragem deve usar um amostrador e regularmente corrigir sua precisão para evitar erros de teste. O tempo de amostragem é controlado dentro de 5 minutos, se o número de amostras for grande, recomenda-se o uso de amostragem de pistola.

Por favor, faça a curva padrão ao mesmo tempo em cada medição，Faça um buraco. Se o teor de substância a ser testada na amostra for elevado demais (amostraO valor de OD é maior do que o valor de OD de um poço padrão di), por favor, dilua primeiro um certo múltiplo (n vezes) com o diluído da amostra e depois determine, no cálculo, por favorde novoMultiplicando o múltiplo de diluição total (x n x 5).

A membrana de vedação é limitada a um uso único para evitar a poluição cruzada.

5. Mantenha o substrato à luz.

6. estritamente de acordo com as instruções de operação, o resultado do teste deve ser determinado com base nas leituras enzimáticas.

Todas as amostras, líquidos de lavagem e vários resíduos devem ser tratados como infecciosos.

Os diferentes componentes do lote deste reagente não devem ser misturados.

Não é possível usar produtos expirados.

10. Se for diferente do manual em inglês, prevalecerá o manual em inglês.