A qualidade das amostras celulares está diretamente relacionada com a confiabilidade e repetibilidade dos resultados experimentais. A Cobury Bio de Xangai apresentará sistematicamente os pontos fundamentais da preparação e conservação de amostras celulares, fornecendo aos pesquisadores referências operacionais padronizadas para garantir que as amostras celulares sejam preservadas no estado mais jia, mantendo suas propriedades biológicas e seu valor experimental.
Etapas-chave para a preparação de amostras celulares
1. Preparação Anterior
- Desenho experimental claro: definir o esquema de preparação de acordo com os objetivos experimentais posteriores (por exemplo, proteômica, transcrição, cultura celular, etc.)
- Preparação de reagentes e materiais de consumo: todos os reagentes e materiais de consumo em contato com as células devem ser estériles e livres de contaminação por nucleosase / protease
- Pré-arrefecimento do equipamento: rotor da centrífuga, tubo de congelamento, etc. pré-arrefecido à temperatura apropriada
Recolha e processamento de células
Confirmação do estado da célula: assegure-se de que as células estejam no período de crescimento logarítico e a taxa de células vivas > 95%
- Tratamento suave: Evite soprar fortemente e limpe com PBS pré-refrigerado ou água salina fisiológica
- Tratamento oportuno: processar o mais rápido possível após a retirada da caixa para reduzir a resposta ao estresse celular
3. Requisitos especiais de processamento
- amostras de análise de proteínas: adicionar a mistura de inibidores de proteases para evitar o congelamento repetido
- Amostras de análise de ácidos nucleicos: uso de materiais de consumo sem RNase / DNase, adicionando protetor de RNA
- Amostras metabólicas: extinção rápida da atividade metabólica com metanol pré-refrigerado ou líquido de extinção especial
Métodos de conservação celular e seleção
Conservação a curto prazo (< 24 horas)
- 4 ° C de conservação: suspenso em meio de cultura ou tampão de quantum completo
- Aplicação: citologia de fluxo, imagem de células vivas e outros experimentos realizados no mesmo dia
- Precauções: Evite a contaminação bacteriana, preservação selada
Conservação a médio prazo (1 semana - 1 mês)
- Conservação a -80 ℃: adicione um protetor de congelamento apropriado
Liquido congelado recomendado:
Cultura celular: soro fetal bovino com 10% de DMSO
- Análise de proteínas: Liquido contendo inibidores de protease
- Análise de ácidos nucleicos: reagentes protetores de RNA (como TRIzol ou conservante especial)
Conservação a longo prazo (> 1 mês)
- Conservação de nitrogênio líquido (-196 ° C): a atividade celular é mantida pelo método mais jia
Procedimento de congelamento:
```
1. Refrigeração do programa: 4 ° C 30 minutos → -20 ° C 2 horas → -80 ° C durante a noite
2. Transferência para a fase de nitrogênio líquido (-150 ° C) conservação a longo prazo
```
- Escolha do tubo de congelamento: informações de marcação de células, data de congelamento, número de transmissões, operador
III. Pontos de controle de qualidade
1. Teste de atividade celular
- Detecção de mancha azul ou MTT antes e depois do congelamento
Atividade celular após a recuperação deve ser > 80% (idealmente > 90%)
2. Controle da poluição
Detecção regular de contaminação
- Observação e espelhagem de contaminação bacteriana e fúngica
- Identificação STR de poluição cruzada celular
3. Marcação e registro
- Códigos de barras ou sistemas de gestão de códigos de barras
- Registro detalhado de origem celular, processamento, localização
Soluções para problemas frequentes
Problemas | Possíveis causas | Soluções |
| baixa atividade celular após a recuperação | o processo de congelamento é resfriado muito rápido | usar a caixa de refrigeração do programa |
| Degradação de proteínas | Deficiência de inibidores de proteases | Adição de várias misturas de inibidores de proteases |
| Degradação de RNA | Contaminação com RNase durante a operação | Utilização de consumíveis sem RNase, processamento rápido |
Contaminação por broncógenos | Contaminação por células originais ou operações | Detecção regular, usando um limpador de broncógenos |
V. Precauções de segurança
Segurança biológica: cumprir os requisitos de nível de segurança biológica correspondentes de acordo com a origem celular
2. Operação de nitrogênio líquido: Use máscara de proteção e luvas para evitar congelamento
Segurança química: reagentes como DMSO são tratados adequadamente para evitar o contato direto com a pele
Tratamento de resíduos: os resíduos celulares são tratados de acordo com o processo de tratamento de materiais bioperigosos
Resumo do Programa de Conservação Recomendado
| Direção de aplicação | Método de conservação recomendado | Temperatura de conservação | Tempo de conservação esperado |
| Cultura de recuperação celular | DMSO + congelamento sérico | Nitrogeno líquido | Mais de 10 anos |
| Western Blot | Risto RIPA | -80°C | 1 ano |
| Extração de RNA | TRIzol ou protetor de RNA | -80 °C | 6 meses |
| Metabólica | 80% metanol extinto | -80 ℃ | 3 meses |
| Citometria de fluxo | PBS com 2% FBS | 4 ℃ | 24 horas |
Sistema de Gestão Inteligente
Recomenda-se que o laboratório crie um sistema eletrônico de gestão de amostras celulares que inclua:
- Rastreamento em tempo real da localização da amostra
- Atualização automática de registro congelado / retirado
Verificações e lembretes de estoque regulares
- Recuperação rápida de informações de amostra

As amostras celulares de alta qualidade são a pedra angular do sucesso experimental. A integridade biológica das amostras celulares é mantida ao mínimo através de processos de preparação padronizados e métodos de conservação científica. Com o desenvolvimento de novas tecnologias, como análise de células únicas e transcriptômica espacial, os requisitos para a qualidade das amostras celulares aumentarão ainda mais. Estabelecer normas rigorosas de gestão de amostras não é apenas uma necessidade para garantir a confiabilidade dos experimentos atuais, mas também um investimento estratégico para preservar valiosos recursos biológicos para pesquisas futuras.