Princípio de congelamento: o princípio de ativação das células congeladas é descongelar rapidamente para evitar que o cristal de gelo recristalize e cause danos às células, levando à morte das células. Depois da ativação celular, leva cerca de alguns dias, ou uma a duas gerações. Só o crescimento celular ou as características voltam ao normal.(por exemplo, a produção de anticorpos individuais ou outras proteínas).

umPassos operacionais:

① O operador deve usar máscaras de proteção e luvas para evitar danos que possam explodir no tubo de congelamento.

② Remova o tubo de congelamento do nitrogênio líquido ou do recipiente de gelo seco, verifique se a tampa está apertada, devido ao processo de enflamento térmico e refrigeração, a tampa é facilmente solta neste momento.

② Coloque o meio fresco em uma lavanderia de 37 ° C para reaquecer, depois de reaquecer, pulverize com 70% de álcool e limpe-o para a mesa de operação estéril.

4. retirar o tubo de congelamento, colocar imediatamente em uma lava de 37 ° C para descongelar rapidamente, agitar suavemente o tubo de congelamento para que ele derreta tudo em 1 minuto, limpar o tubo de conservação com 70% de etanol, mover para dentro da mesa de operação estéril.

② Remover 0,9 ml de suspensão celular descongelada, adicionar lentamente no recipiente de cultura com meio de cultura (a proporção de diluição é de 1:10 a 1:15), misturar uniformemente e colocar na cultura do compartimento de cultura de CO2. Extrair 0,1 ml de suspensão celular descongelada para teste de sobrevivência.

Se o congelador é removido imediatamente após o descongelamento (por exemplo, DMSO ou glicerol), depende do tipo de célula e, em geral, não é necessário remover imediatamente o congelador. Para a remoção imediata, adicionar a suspensão celular descongelada a um tubo de centrifugação contendo 5-10 ml de meio de cultura, centrifugar por 1.000 rpm, 5 minutos, remover o líquido superior, adicionar o meio fresco, misturar uniformemente e colocar na cultura de CO2.

Se não for necessário remover imediatamente o congelador, substitua o meio no dia seguinte após a descongelação.

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