Normalmente podemos usarELISAAs amostras de teste são de vários tipos, como soro, plasma, urina, soro de cultura celular ou líquido homogêneo de tecido, etc., diferentes tipos de tratamento pré-amostra de teste são diferentes. O tratamento correto das amostras é garantidoELISAPara verificar a precisão e a precisão * passos, abaixo uma breve descrição do tratamento de diferentes tipos de amostras.

1、 soro

O soro é frequentemente usado zuiELISAUma amostra de tipo de teste, o tratamento também é relativamente simples.

Coleta de amostras de sangue com tubos de ensaio ou centrífugas livres de termogênio ou endotoxinas, colocando o tubo de ensaio ou a centrífuga à temperatura ambiente2horas ou4Temperatura durante a noite para que o soro seja analisado. (Coloque o tubo de ensaio ou o tubo centrífugo inclinado para aumentar a seção transversal do líquido, permitindo maior precipitação do soro.)4℃1000×gCentrífuga20minutoRecolha cuidadosamente. Recomenda-se dividir o soro em várias cópias,-20C ou-80Conservar a temperatura para evitar o congelamento repetido.

A hemolisis deve ser evitada durante a coleta de sangue, pois os glóbulos vermelhos liberam substâncias com atividade peroxidasa quando se fissam.HRPPara marcaçãoELISAHá cores não específicas no teste, o que resulta em imprecisões no teste. A contaminação bacteriana também deve ser evitada, pois o organismo pode conter indógenos.HRPIsso resulta em um falso positivo no teste.

2、 Plasma sanguíneo

Coleta de amostras de sangue com vasos sanguíneos ou centrifugadores contendo anticoagulantes, após a coleta30 minutosDentro4℃ 1000×gCentrífuga15 minutosRemova o plasma imediatamente. Dividir várias cópias,-20C ou-80Conservar a temperatura para evitar o congelamento repetido. Evite usar amostras hemolíticas ou hiperlipídicas.

Os anticoagulantes mais utilizados sãoEDTAHepatina de sódio e citrato de sódio, etc., o teste também deve ler cuidadosamente as instruções do kit, verificar se o kit tem requisitos especiais contra o coagulante.

3、 Cultura de células

Leve a cultura celular para o tubo centrífugo,1000×gCentrífuga20 minutosremover os fragmentos celulares e as impurezas,-20C ou-80Conservar a temperatura para evitar o congelamento repetido.

4、 Liquido de fissão celular

1） Absorber o meio dentro da placa de cultura, digerir as células com a pansina, adicionando uma quantidade adequada de meio para soprar as células da placa de cultura. As células suspensas podem ser omitidas.

2） Recolha de suspensão celular,1000×gCentrífuga10 minutosElimine o meio de cultivo e use pré-refrigerado.PBSlavagem3Segunda vez.

3） Adicione a quantidade adequada de pré-arrefecimentoPBSOu ressuspender as células com lysis celulares (adicionando inibidores de protease antes da administração). Normalmente.6A quantidade de células necessárias para uma placa de buraco150~250μL de PBSSuspender novamente.

4） Coloque a amostra no-20C ou-80℃, deixe a amostra congelada, deixe a amostra descongelada a temperatura ambiente e derreta repetidamente várias vezes para que as células se desintegram completamente. A amostra também pode ser quebrada por ultra-som para alcançar o objetivo da fissura.

5） 4℃10000 × gCentrífuga10 minutosremover os fragmentos celulares, remover-20C ou-80Conservar a temperatura para evitar o congelamento repetido.

5Organizar uniformemente a mola

1） Usar amostras de tecidoPBS (0,01)M, PH 7,4）Lave e elimine o sangue ou as impurezas restantes na superfície do tecido.

2） Pese o bloco de tecido, depois de registrar o corte, o bloco triturado deve ser o menor possível para facilitar a absorção mais completa

3） Adicionar tecido pré-refrigerado em certa proporçãoPBS(Adicionando inibidores de protease antes da administração) homogeneize, colocando-o no gelo ou em banho de gelo. (Normalmente por peso:PBSvolume=1:9proporção, por exemplo,1 gramostra de tecido correspondente9 mldePBSO volume específico pode ser ajustado adequadamente de acordo com as necessidades experimentais, e a concentração da amostra deve ser calculada após a detecção por múltiplos de diluição correspondentes).

4） Sucionar o molho uniformemente para o tubo centrífugo,4℃5000×gCentrífuga5 ~ 10 minutosLimpe-o,-20C ou-80Conservar a temperatura para evitar o congelamento repetido.

6、 Outras amostras biológicas líquidas, como urina e saliva

1000 × gCentrífuga20 minutosRemover-se pode ser detectado.

Em geral, porqueELISAApenas o teor de proteína solúvel pode ser detectado, portanto, deve-se garantir que todas as amostras sejam líquidos clarificados e que os precipitados ou suspensões sejam removidos por centrifugação.

Para garantir a precisão do teste, o-20C ou-80A amostra de C1~6teste em um mês;4A amostra conservada deve ser1Teste na semana.

Além disso, a amostra não deve conterNaN₃Porque...NaN₃Vai suprimir.HRPatividade, resultando em resultados falsos negativos.