Rat IL-2sR Elisa Kit método de lavagem:

Máquina de lavar placas automática: adicione 350 μl de líquido de lavagem a cada buraco, com um intervalo de injeção e aspiração de 60 segundos. Lave o prato cinco vezes.

2. lavagem manual da placa: descarte o líquido dentro do buraco, secar no papel absorvente limpo, adicionar 350 μl de líquido de lavagem a cada buraco, mergulhar por 1-2 minutos, aspirar (não pode tocar a parede da placa) ou descarte o líquido dentro da placa de marcação enzimática, secar no papel absorvente grosso. Lave o prato cinco vezes.

Antes do início do experimento, os reagentes devem ser equilibrados a temperatura ambiente. Ao preparar o reagente ou a amostra, deve ser misturado adequadamente e tentar evitar a espuma.

1. amostragem: furo em branco, furo padrão, furo de amostra a medir, respectivamente. O orificio vazio adiciona 100 μl de diluição da amostra, o orificio residual adiciona 100 μl de produtos padrão ou amostras a serem medidas, observe que não há bolhas, adicionar a amostra ao fundo da placa de marcação enzimática durante a amostragem, tente não tocar a parede do orificio, agite suavemente e misture. Enviar a placa de marcação enzimática e incubar a 37 ° C por 2 horas. Para garantir a validade dos resultados do experimento, use uma nova solução padrão para cada experimento.

Eliminar o líquido, secar, adicionar 100 μl de líquido de trabalho Detection Ab em cada orifício (preparado dentro de 15 minutos antes do uso), placa de marcação enzimática com revestimento, 37 ° C durante 1 hora.

3. descarte o líquido dentro do buraco, arremessar e secar, lavar a placa 3 vezes, cada mergulho por 1-2 minutos, cerca de 350 μl / por buraco, arremessar e tocar no papel de absorção de água para secar o líquido dentro do buraco.

100 μl de líquido de trabalho HRP Conjugate por orifício (preparado dentro de 15 minutos antes da administração), além de revestimento, a 37 ° C durante 1 hora.

Eliminar o líquido dentro do buraco, secar, lavar a placa 5 vezes, método e passo 3.

6. 100 μl de solução de substrato por poço, placa de marcação enzimática com revestimento de 37 ° C para incubar a luz por cerca de 15 minutos (encurtado ou prolongado, conforme apropriado, de acordo com as circunstâncias reais de coloração, mas não pode exceder 30 minutos. Pode ser terminado quando o poço padrão aparecer um gradiente evidente).

Adicione 50 μl de líquido final a cada orifício para terminar a reação, neste momento o azul vira amarelo. A ordem de adição do líquido final deve ser a mesma que a ordem de adição do líquido de substância.

Medir imediatamente a densidade óptica de cada orifício (OD) com um calibrador enzimático em 450 nm de comprimento de onda. A fonte de energia do calibrador enzimático deve ser aberta com antecedência, o instrumento deve ser pré-aquecido e o procedimento de detecção deve ser configurado.

Depois da conclusão do experimento, o reagente não usado deve ser mantido no frigorífico até o fim do período de validade.