No campo da terapia celular, a eficiência e a estabilidade da cultura de células T afetam diretamente o sucesso e o fracasso das aplicações clínicas. As placas de 96 buracos e de 6 buracos, como dois veículos de cultura comuns, têm diferenças operacionais não apenas na escala, mas também em detalhes críticos da regulação do microambiente celular.

1. Uniformidade da vacinação celular

As características de alto fluxo da placa de 96 buracos exigem uma distribuição mais precisa da suspensão celular. Recomenda-se o uso de um pipete multicanal em combinação com uma centrífuga de baixa velocidade (200 x g, 5 minutos) para promover a deposição celular e evitar o "efeito de borda" causado pela tensão superficial do líquido nos poros marginais. Enquanto a placa de 6 buracos tem um volume de buraco único maior (2-4 mL), é necessário usar o "método de placa cruzada" para misturar manualmente para garantir a distribuição uniforme das células.

2. Estratégia de substituição de meios

A placa de 96 buracos é fácil de perturbar as células de adesão durante a metade da troca de líquido, e pode inclinar o ângulo de 45 ° para absorver lentamente a limpeza superior; Se utilizar um meio sem soro, é necessário adicionar uma cola pré-matriz (por exemplo, Corning). ® Matrigel) melhora a adesão. As placas de 6 buracos podem ser substituídas por meio de um método de troca de fluido por gradiente para substituir 50% do meio de cultura e depois de 24 horas, para reduzir o estresse celular.

Otimização da troca de gás

Quando se empilha uma placa de 96 buracos, recomenda-se a utilização de uma tampa de placa com membrana permeável (por exemplo, Greiner Bio-One CELLSTAR). ®）， E controle empilhamento não mais de 3 camadas para evitar a falta de oxigênio no orifício central. A placa de 6 orifícios pode ser colocada diretamente em uma caixa de mistura de 5% de CO2, mas é necessário prestar atenção à distância da borda da placa de orifício do ventilador da caixa para evitar a evaporação excessiva local.

4. Técnicas de monitoramento fenótipo

As placas de 96 buracos recomendam o uso de sistemas de imagem de alta connotação, como o ImageXpress Micro, para digitalização multiponto que elimina automaticamente os dados de interferência de bolhas por meio de algoritmos de IA. A placa de 6 buracos é mais adequada para pré-amplificação antes da seleção de fluxo, e a amostragem é recomendada para usar o "método de perfuração diagonal" com a cabeça de pistola de 1 ml para perfurar 3 vezes ao longo da diagonal para garantir a representatividade da amostra.

‍

‍