Kit de teste ELISA para broncógenos de pneumonia suína (MP)

Este kit deve ser usado apenas para pesquisa científica e não para diagnóstico médico.

Porcos（Porco）Brancos da pneumonia（MP）Kit de teste ELISA

Manual de instruções

Princípio de teste

Kit de teste de imunosorbenção ligada a biopsia de um passo com anticorpos duplos (Elisa).Para pré-embalagemporBrancos da pneumonia（MP）O pacote de anticorpos é colocado em microporos, adicionando amostras, produtos padrão,Os anticorpos marcados por HRP são detectados, aquecidos e lavados. Colorado com o substrato TMB, o TMB é convertido em azul sob a catalisação da peroxidase e em amarelo final sob a ação do ácido. Luz de cor e amostraBrancos da pneumonia（MP）apresentaçãoRelacionado. Usando enzimas emDetermine a absorção (OD) ao comprimento de onda de 450 nm e calcule a concentração da amostra.

Métodos de recolha, tratamento e conservação de amostras

1. soro: usar tubos de ensaio sem termogênios e endotoxinas, evitar qualquer estímulo celular durante a operação, depois de coletar sangue, 3000 centrifugação para separar rapidamente e cuidadosamente o soro e os glóbulos vermelhos durante 10 minutos.

Plasma: EDTA, citrato ou hepatina anticoagulante. 3.000 rotações centrífugas durante 30 minutos.

Liquido supercelular: 3.000 rotações centrífugas durante 10 minutos para remover partículas e polímeros.

Homogenização do tecido: adicione o tecido a uma quantidade adequada de água salina fisiológica. 3.000 rotações centrífugas durante 10 minutos.

Conservação: se a amostra não for detectada em tempo útil após a coleta, por favor, divide-a em uma única dose, congele-a a -20 ° C, evite o descongelamento repetido, descongela-a a temperatura ambiente e certifique-se de que a amostra seja descongelada uniformemente e completamente.

Artigos próprios

1. Marcadores enzimáticos (de 450 nm)

2. Amostradores e cabeças de alta precisão:0,5-10uL, 2-20uL, 20-200uL, 200-1000uL

3. 37 ° C termostato

Precauções operacionais

1. Caixa de teste conservada2-8 ° C, antes de usar o equilíbrio de temperatura ambiente por 20 minutos. O líquido de lavagem concentrado retirado do frigorífico terá cristalização, o que pertence ao fenômeno normal, o aquecimento do banho de água faz com que o cristal se dissolva depois de ser usado novamente.

2. As placas não utilizadas no experimento devem ser imediatamente colocadas de volta no saco autofechado e seladas (secadas a baixa temperatura).

3. A concentração éO padrão S0 de 0 pode ser considerado um controle negativo ou um espaço em branco; A amostra foi diluída 5 vezes quando operada de acordo com as instruções, o resultado final é multiplicado por 5 para a concentração real da amostra.- É.

4. Operação de crescimento térmico de acordo com o tempo, a quantidade e a ordem indicadas nas instruções.

5. Agite bem todos os componentes líquidos antes de usar.

Composição do Kit

Nota: Produtos padrão (S0-S5) concentraçãoEm seguidaPara:0, 1,25, 2,5, 5, 10 e 20 ngem / ml

Preparação dos Reagentes

20 x diluição do tampão de lavagem: a água destilada é diluída em 1: 20, ou seja, 1 porção de tampão de lavagem 20 x mais 19 porções de água destilada.

Método de lavagem

1. Lavagem manual: descarte o líquido dentro dos buracos, encha cada buraco com líquido de lavagem e deixe-o em posiçãoDepois de 1 minuto, descarte o líquido dentro do buraco e seque no papel de absorção de água para lavar a placa 5 vezes.

2. Máquina de lavar placas automática: injeção de lavagem por orifício350μL， Mergulhe por 1 minuto e lave a placa 5 vezes.

Kit de teste ELISA para broncógenos de pneumonia suína (MP)Passos de operação

1. Equilíbrio de temperatura ambienteDepois de 20 minutos, retire a placa necessária do saco de folha de alumínio e coloque a placa restante em 4 ° C com um saco selhado.

2. Definição de perfurações padrão e perfurações de amostraProdutos padrão com diferentes concentrações50 μL;

3. Adicione primeiro o buraco da amostraAmostras a serem testadas10μL， AdicionandoLiquido diluído da amostra40 μL;Nenhum buraco em branco

4. Além dos buracos em branco,Peroxidase de raiz de moringa é adicionada a cada orifício no orifício padrão e no orifício da amostra (HRP) marcado com anticorpos de detecção de 100 μL, selar o furo de reação com uma membrana de vedação, 37 ° C banheiro de água ou termostático para 60 min.

5. Eliminar o líquido, absorver água e secar no papel, encher cada buraco com o líquido de lavagem, colocar1min， Elimine o líquido de lavagem, assorbe água no papel e seque, assim, repita a placa 5 vezes (também pode ser lavada com uma máquina de lavar placas).

6. Adiciona substância a cada buracoA, B cada 50 μL, incubar a luz a 37 ° C por 15 min.

7. Adicionar líquido terminante a cada buracoEm 50 μL, em 15 min, medir o valor de OD de cada orifício em um comprimento de onda de 450 nm.

Resultado do julgamento

Desenha curvas padrão: emNa folha de cálculo do Excel, a concentração do produto padrão como coordenadas transversais, o valor do OD correspondente como coordenadas longitudinais, desenhe a curva de regressão linear do produto padrão e calcule os valores de concentração da amostra de acordo com a equação da curva.

Kit de teste ELISA para broncógenos de pneumonia suína (MP)Desempenho da caixa

1. Precisão: Regressão linear padrão com coeficientes relacionados à concentração esperadaR é maior ou igual a 0,9900.

2. Sensibilidade: concentração máxima de detecção di menor que0,1 ng/ml- É.

3. Especificação: não se cruza com outros análogos estruturais solúveis.

4. Repetibilidade: coeficientes de variação dentro e entre placas são menores que15%.

5. Armazenamento:2-8 ° C, proteção contra a luz e a umidade.

6. Período de validade:6 meses

Disclaimer de responsabilidade

1. Os kits são destinados apenas a estudos e não devem ser usados ​​em ensaios clínicos ouRatoTodas as consequências decorrentes do experimento corporal são assumidas pelo experimentador e a empresa não é responsável.

2. Seguindo estritamente as instruções, o experimentador viola as instruções de operação, e as consequências são assumidas pelo experimentador.