Células endoteliais microvasculares pulmonares humanas

Propriedades básicas das células

Nome da célula:Células endoteliais microvasculares pulmonares humanas

Fonte do tecido: tecido pulmonar

Fonte: Humano

Especificações: garrafa de cultura celular 5 x 105 células / T25

Introdução das células:Células endoteliais microvasculares pulmonares humanasisolado do tecido pulmonar; Os pulmões são os órgãos respiratórios do corpo, localizados no peito, cada um à esquerda e à direita, cobertos acima do coração. O pulmão tem folhas, duas à esquerda e três à direita, totalizando cinco folhas. O sistema pulmonar-transpulmonar (refere-se aos tubos respiratórios, brônicos, etc.) está ligado à garganta e ao nariz, portanto, a garganta é chamada de porta do pulmão e o nariz é o caminho externo do pulmão. As células endoteliais microvasculares estão intimamente envolvidas em uma série de respostas fisiológicas e inflamatórias, incluindo regeneração, desenvolvimento e cicatrização de feridas. As células são em forma de nave ou poliangular, e formam uma única camada em forma de pedra ou pavimento. As células endoteliais microvasculares pulmonares formam uma barreira semiseletiva que é importante para a troca de gases pulmonares, regulando o fluxo de líquidos e solúveis entre o sangue e o intermédio pulmonar.

Condições do pacote: PLL (0,1 mg / ml), gelatina (0,1%)

Médio de cultura: FBS, aditivos de crescimento, penicilina, estreptomicina, etc.

Frequência de troca: a cada 2-3 dias

Características de crescimento: parede

Morfologia celular: endotelial

Características de transmissão: 2-3 gerações

Proporção: 1:2

Liquido digestivo: 0,25%

Condições de cultivo: fase gás: ar, 95%; CO2，5%

2. Uso:

Células endoteliais microvasculares pulmonares humanasÉ um tipo de célula adherente, a morfologia celular é endotelial, sob o processo de operação padrão do departamento de tecnologia, as células podem ser transmitidas de 2 a 3 gerações; Recomenda-se que você faça experimentos relevantes o mais rápido possível após receber as células.

Depois que o cliente receber a célula, siga o método abaixo.

Retire a garrafa de cultura celular T25, desinfete o corpo da garrafa com 75% de álcool, retire a membrana bucal e coloque-a em uma caixa de cultura celular de 37 ° C, 5% de CO2 e umidade saturada por 3-4 h para estabilizar o estado celular.

2. Digestão celular

1) extrair o meio da garrafa de cultura de células T25 e limpar as células uma vez com PBS;

2) Adicionar 0,25% 1mL de líquido digestivo para a garrafa de cultura T25, ligeiramente girar a garrafa de cultura para o líquido digestivo cobrir todo o fundo da garrafa de cultura, aspirar o líquido digestivo em excesso, 37 ° C banho quente 1-3min; Observar sob o microscópio invertido, até que as células retornem ao círculo, adicionar 5 ml de meio para terminar a digestão;

3) misturar suavemente com uma suína, vacinar a garrafa de cultura T25 de acordo com a proporção de transmissão, em seguida, adicionar o meio de cultura fresco a 5mL, colocar em uma caixa de cultura celular de 37 ° C, 5% de CO2, umidade saturada para a cultura em reposição;

4) Depois da adesão das células, observação da cultura; Em seguida, substitua o meio fresco de acordo com a frequência de troca de líquido.

3. Descanso das células

1) Recolha toda a suspensão celular, 1000rpm, centrífuga 5min, retenção de precipitação;

2) Adicionar 0,25% de 0,5mL de líquido digestivo ao tubo centrífugo, ressuspender a precipitação e colocar a 37 ° C para digestão por 3 min (ou 4 ° C para geladeira por 5-7 min); Adicionar 5 ml de meio dentro do tubo centrífugo para terminar a digestão;

3) Depois de 1000rpm, centrifugar 5min, descartar a limpeza superior, precipitar com 5 ml de meio de cultura em suspensão e inocular em uma nova garrafa de cultura;

4) Depois da adesão das células, observação da cultura; Em seguida, substituir o meio fresco (37 ° C pré-aquecimento) de acordo com a frequência de troca de líquido.

5) As células da parede da garrafa original são tratadas de acordo com a digestão normal.

4. Experimentos celulares

Devido à especificidade da adesão das células originais, as células originais da adesão são transferidas para outros vasos experimentais após a digestão (como o reptil de vidro, a placa de cultura, o prato de petri confocal, etc.), quando os vasos experimentais precisam ser embalados para melhorar a adesividade das células e evitar que as células não afetem o experimento devido à adesão; O pacote é frequentemente escolhido com colágeno de cauda de rato I (2-5 μg / cm2), polilisina PLL (0,1 mg / ml), gelatina (0,1%), dependendo do tipo de célula. Células suspensas / semi-suspensas não precisam ser embaladas.

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Atenção à cultura celular:

Precauções sobre a cultura de células originais. A cultura de células primordiais é uma técnica experimental muito importante, e dominar essas precauções pode tornar seu experimento mais suave.

Primeiro, a operação estéril é fundamental. Certifique-se de manter o ambiente operacional limpo e evitar a contaminação por bactérias ou mofo, caso contrário, o experimento falhará.

Em segundo lugar, a escolha dos meios de cultura e soros adequados também é importante. Diferentes células têm necessidades diferentes de meio de cultura e soro, então escolha o meio e soro adequados de acordo com o tipo de célula.

É também um componente da cultura celular. Para ser preparado fresco, também deve ser suplementado regularmente durante o armazenamento.

Durante a cultura celular, a cultura em reposo também é muito importante. As células precisam de algum tempo para se adaptar ao novo ambiente após a separação digestiva, por isso é importante evitar a extração frequente de garrafas para observação durante este período.

Além disso, o tempo de digestão deve ser bem controlado. Geralmente, as pequenas partículas de tecido visíveis ao olho nu podem ser digeridas, o tempo de digestão excessivo pode levar a danos celulares agravados, afetando a taxa de sobrevivência da cultura celular.

Por fim, para alguns tipos especiais de células, pode ser necessário adicionar alguns fatores de crescimento especiais para promover o crescimento e a proliferação celular. No entanto, é importante notar que os custos desses fatores de crescimento são geralmente mais altos.