Kit humano de protease vesicular 1 (CASP1)

Espécie completa Kit humano de protease vesical 1 (CASP1)
Introdução
A enzima de conversão caspase-1/interleukina-1 (ICE) é uma enzima evolutivamente conservadora que pode decompor outras proteínas, como os precursores das citocinas inflamatórias interleukina 1beta e interleukina 18, e o indutor de febre Gasdermin D, proteínas em péptidos maduros ativos. Uma vez ativado através da formação de um complexo inflamatório, ele inicia duas citocinas inflamatórias pela fissão - a interleukina 1β (IL-1β) e a interleukina 18 (IL-18), e a fissão da Gasdermin D inicia a fitoxicidade (uma via de morte celular programada) e as duas citocinas inflamatórias ativadas pela Caspase-1 são eliminadas das células, induzindo ainda mais uma resposta inflamatória nas células vizinhas. As doenças associadas ao CASP1 incluem a varicela e a doença de Shiga. O imunoassay CASP1 humano deste kit é um ELISA de fase sólida de três etapas para medir o CASP1 humano em cultivos celulares de serum, soro e plasma. O kit contém a expressão de E. coli recombinante humano CASP1 e anticorpos produzidos contra a proteína recombinante. Os resultados obtidos usando CASP1 humano natural mostraram curvas lineares paralelas às curvas padrão obtidas usando o padrão recombinante. Estes resultados sugerem que o kit pode ser usado para medir os valores de massa relativa do CASP1 humano natural.

Princípio de teste

Kit de teste com método de clamping de anticorpos duplosTecnologia de ELISA: O pacote de anticorpos de captura é colocado em uma placa de marcação enzimática, captura de amostras e produtos padrão para o teste CASP1, após a incubação e a limpeza, depois de adicionar os anticorpos de detecção marcados para a limpeza após a incubação, para formar o complexo imunológico "captura de anticorpos - antígeno - anticorpos de detecção", em seguida, adicionar a peroxidase de raiz morgana ligada à molafina para a incubação, após a incubação e a limpeza, depois de adicionar o líquido de coloração TMB, se houver um teste na amostra, então adicionar o líquido terminante para parar a reação. Os componentes livres durante o teste são lavados, os valores de OD são medidos a 450 nm com um calibre enzimático, a clareza da cor é proporcional ao conteúdo do objeto a ser testado na amostra e a concentração de CASP1 na amostra é calculada através do desenho de curvas padrão.

Pontos de operação

Ao misturar a solução de proteína, deve sempre evitar a espuma. Para evitar a contaminação cruzada, a cabeça do pipete deve ser substituída ao adicionar cada produto padrão, amostra e reagente. Além disso, cada reagente deve ser usado separadamente.

Certifique-se de que o reagente é adicionado ininterruptamente ao orifício da placa. Para garantir resultados precisos, é necessário colar bem a placa durante a etapa de incubação.

Quando a máquina de lavar placas automática é usada, adicionar um período de imersão de 30 segundos após a adição do tampão de lavagem ou girar a placa 180 graus entre as etapas de lavagem pode melhorar a precisão da medição.

O colorante deve permanecer incolor até ser adicionado à placa. Certifique-se de que o indicador de cor não seja exposto à luz. O indicador de cor deve mudar de incolor para azul.

O líquido final deve ser adicionado à placa na mesma ordem que o colorante. Após a adição do líquido terminante, a cor formada nos buracos mudará de azul para amarelo. Os buracos verdes indicam que o terminal não foi misturado adequadamente com a solução de matriz.

Outros materiais necessários

Calibrador enzimático, que contém comprimento de onda de medição de 450nm, ao mesmo tempo que contém melhor comprimento de onda de correção de 600-680nm;

Pipetes e cabeças de arma;

Água destilada ou desionizada;

4. cilindro de medição de 100-1000 ml;

5. Máquina de lavagem automática de garrafas, pistolas ou placas microporosas;

Oscillador de placa microporosa de órbita horizontal, capaz de manter a velocidade de 500 ± 50 rpm;

Tubos de ensaio para diluir produtos padrão e amostras.

Espécie completa Protease vesicalKit humano 1 (CASP1)
Atenção

O líquido final fornecido nesta caixa é uma solução de ácido sulfúrico diluído, com certa corrosividade, deve ser operado com cuidado.

Alguns ingredientes deste kit contêm conservantes que podem causar reações alérgicas na pele e devem ser usadas máscaras para evitar a inalação da névoa.

O colorante B pode causar irritação à pele, olhos e vias respiratórias, e uma máscara deve ser usada para evitar a inhalação da névoa.

Use luvas de proteção, produtos de proteção ocular e facial e lave as mãos após o tratamento.

Preparação do Reagente

Coloque todos os reagentes no equilíbrio de temperatura ambiente por cerca de 30 minutos antes de usar.

Configuração de líquido de lavagem / diluição: se o líquido de lavagem / diluição (20 x) tiver cristalização, deve ser aquecido a 37 ° C para que o cristal se dissolva completamente. Diluir com água destilada 1: 20 (por exemplo: 1 ml de líquido de lavagem concentrado com 19 ml de água destilada)

Configuração padrão

Extrair o produto padrão da caixa, preparar7 tubos de ensaio, primeiro10μg / mlProdutos padrão (200 μL) de acordo com a demanda para absorver uma certa quantidade de 1 x diluição diluída a 500ng / mL (por exemplo: 50 μL de líquido padrão + 950 μL de 1 x diluição, preparação para obter 1000 μL de 500ng / mL de concentração padrão), em seguida, em 6 tubos de ensaio adicionar 500 μL de 1 x diluição, respectivamente, em 6 tubos de ensaio separados de 500ng / mL padrão, em seguida, 2 vezes mais do que diluição a 6 gradientes, combinando 7 concentrações de produtos padrão, em seguida:500% de / ml, 250% de / ml, 125% de / ml, 62,5 ng / ml, 31,25 ng / ml, 15,625 ng / ml,Extraído da solução padrão de concentraçãoO produto padrão de 500 μL para o próximo tubo de ensaio, suavemente soprar e misturar, e assim por diante, para diluir o produto padrão por vezes (como mostrado na figura), 1 x diluído é usado como produto padrão de concentração zero (0ng / mL)

Cálculo dos resultados

Cálculo da média dos padrões e dos perfuros compostos da amostraO valor de OD e subtrair o valor de OD do buraco em branco como valor de correção. Use a concentração como coordenada horizontal e o valor OD como coordenada longitudinal, desenhe uma curva padrão para uma função lógica de quatro parâmetros em papel de coordenadas (remova os valores do grupo em branco ao fazer o gráfico) ou crie uma curva padrão usando um software de computador capaz de gerar ajustes de curvas lógicas de quatro parâmetros (4-P). Se o valor de OD da amostra for superior ao limite superior da curva padrão, deve ser medido novamente após diluição adequada e multiplicado pelo múltiplo de diluição correspondente ao cálculo da concentração da amostra.- É.

Dados de exemplo

Os dados e curvas abaixo são apenas para referência e os experimentadores devem criar curvas padrão com base em seus próprios dados experimentais.

A curva padrão mostrada neste gráfico é apenas para fins de exemplo. O cálculo do resultado deve ser baseado na curva padrão desenhada no mesmo produto padrão do ensaio.
Sensibilidade

Após o teste da amostra, a sensibilidade do teste é3.91ng / ml.

Especificação

O kit de teste identifica pessoas naturais e recombinantesCASP1- É.

Outras proteínas relacionadas são preparadas em tampão diluído como50ng/mL， Determinar a reação cruzada. Nenhuma reação cruzada evidente foi observada.

Resumo das etapas experimentais
Adicione produtos padrão e amostras, reação de proteção contra a luz de 37 ° C 1,5 h, lavar 3 vezes.

2. teste de anticorpos,Reação à luz de 37 ° C 1 h, lavar 4 vezes.

3. compostos enzimáticos,Reagir a luz a 37 ° C por 30 minutos e lavar 4 vezes.

4. Adicione o líquido de coloração, a reação de proteção contra a luz de 37 ° C por 15 minutos.

5. Adicione o líquido terminante e leia em 5 minutos

pessoaProtease vesical1(CASP1)Kits para detecção quantitativa de cultivos celulares em seres humanos, soros e plasmaCASP1Antes de usar este produto, você deve ler o manual completo.O homem.Kits de ELISA para uso científico e não para outros diagnósticos- É.