5.637 células de câncer da bexiga

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Linha celular/cepa:

Linha celular (Linha celular): a cultura original é transmitida com sucesso como uma linhagem celular, composta por linhagens de células que existiam originalmente na cultura original.

Linha celular (Cell Strain): obtenção de propriedades ou marcadores especiais a partir de culturas ou linhagens celulares originais através de seleção ou clonagem chamada linha celular. As propriedades ou marcadores especiais da linhagem celular devem estar sempre presentes durante todo o período de cultura. Se a transmissão não pode continuar ou o número de transmissões é limitado, chamada cepa celular finita; Se é possível transmitir continuamente, é chamado de cepa celular contínua. Para as células tumorais humanas, cultivadas in vitro por mais de meio ano, o crescimento é estável e a transmissão contínua pode ser chamada de cepa ou linhagem contínua.

1) Cultivação inicial

A cultura primária é também conhecida como cultura primária, ou seja, a primeira cultura de células, tecidos e órgãos extraídos diretamente do corpo. Uma vez que as células foram submetidas a subcultura, não são mais chamadas de cultura primária, mas de linha celular.

2) Linhas celulares

A cultura inicial começa a gerar as células após a primeira cultura, chamadas linhagens celulares. Se uma linha celular tem uma vida limitada, é chamada de linha celular finita. Linhas celulares que têm capacidade de reprodução ilimitada para sobreviver são chamadas linhas celulares contínuas ou linhas celulares infinitas. A maioria das linhagens celulares infinitas se heterogeneizam, com nucleótipos heteropolitos, e algumas podem ter se tornado células malignas e, portanto, são essencialmente linhagens celulares transformadas. As linhagens celulares infinitas são apenas vitais (ou imortais), mas ainda conservam a inibição do contacto e a carcinogenicidade sem vacinação heterogênica; Alguns não só têm vida eterna, mas a vacinação estrangeira também tem tumoricidade, o que indica que se tornou maligna. Essas duas linhas celulares infinitas de propriedades diferentes são frequentemente menos rigorosas na literatura nacional e estrangeira. Para clareza conceitual, este livro é usado para ter linhas celulares infinitas malignas! Linhas celulares malignas transformadas! A palavra pode ser melhor. Para as linhagens celulares que são apenas eternas e não malignas, é possível usar linhagens celulares infinitas ou linhagens celulares transformadas. As linhagens de células NIH3T3, Rat-1, 10T1/2, etc. atualmente em circulação pertencem a esse tipo.

Operações de cultura celular:

1) Recuperação de células: descongelar rapidamente o tubo de congelamento contendo 1 mL de suspensão celular em banho de água de 37 ° C, adicionando 4 mL de meio de cultura para misturar uniformemente. Centrifugar por 3 min a 1000 rpm, descartar o líquido e adicionar 1-2 mL de meio de cultura depois de soprar bem. Em seguida, adicione toda a suspensão celular em uma garrafa com uma quantidade moderada de meio para a cultura durante a noite (ou adicione a suspensão celular em um prato de 6 cm com cerca de 4 mL de meio para a cultura durante a noite). No dia seguinte, troce o líquido e verifique a densidade celular.

2) Transferência celular: se a densidade celular chegar a 80% -90%, a cultura de transmissão pode ser realizada. a、 Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

b、 Adicione 1 mL de líquido digestivo (0,25% Trypsin-0,53 mM EDTA) na garrafa de cultura para que o líquido digestivo penetre todas as células, descarte o líquido digestivo, coloque a garrafa de cultura em uma caixa de 37 ° C para digerir 1 -3min (dependendo da digestão celular), em seguida, observe a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e desmontar, rapidamente pegue de volta a mesa de operação, toque alguns toques na garrafa de cultura depois de adicionar 2-3ml de meio para terminar a digestão. Depois de carregar suavemente em um tubo de centrifugação estéril, centrifugar por 1000 rpm por 5 min, descartar o líquido superior e adicionar 1-2 ml de líquido de cultura depois de soprar bem. - É.

c、 Divida a suspensão celular em proporção 1: 2 em um novo prato ou garrafa com 8 ml de meio e coloque-a em uma caixa de cultura.

3) Congelação celular: quando as células estão em bom estado de crescimento, as células podem ser congeladas. A garrafa T25 abaixo é um exemplo;

a、 Coletar as células, carregar em um tubo de centrifugação estéril, centrifugar em 1000 rpm por 4 min, descartar o líquido superior, limpar novamente com PBS, descartar o PBS para realizar a contagem de células.

b、 De acordo com o número de células adicionar líquido de congelamento de células sem soro, para que a densidade celular 5 × 106 ~ 1 × 107 / mL, misturar suavemente, congelar 1 mL de suspensão celular por tubo de congelamento, prestar atenção ao tubo de congelamento para marcação.

c、 Coloque o tubo de congelamento no frigorífico de -80 ° C e depois de 24 h para o armazenamento de nitrogênio líquido. Registre a localização do tubo de congelamento para a próxima coleta.

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