emKit de ELISA de células humanasÉ importante escolher uma variedade de condições experimentais, incluindo:

　　

1, seleção de veículos sólidos: muitas substâncias podem ser usadas como veículos sólidos, como cloruro de polivinilo, poliestireno, poliacrilamida, celulose, etc. A forma pode ser uma placa concava, tubo de ensaio, contas, etc. Atualmente, o uso comum é 40 buracos de poliestireno. Independentemente do veículo, a triagem pode ser feita antes do uso: os pacotes são submetidos a quantidades equivalentes de antígeno, reagem nas mesmas condições experimentais, observam se a reação de coloração é uniforme e julgam se suas propriedades de adsorção são boas.

　　

Escolha de anticorpos (ou antígenos) embalados: quando os anticorpos (ou antígenos) são adsorvidos à superfície do veículo sólido, a pureza é necessária, geralmente o pH é necessário entre 9,0 e 9,6. A temperatura, o tempo e a quantidade de proteína também têm um efeito. Geralmente 4 ° C para uso de 18-24 horas. É necessário titrar a concentração apropriada do pacote de proteína: ou seja, diferentes concentrações de proteína (0,1, 1,0 e 10 μg / ml, etc.), observando os valores de OD da amostra positiva ao mesmo tempo em outras condições de ensaio. Escolha a concentração de OD zui grande, quantidade de proteína zui pequena. Para a maioria das proteínas, geralmente é de 1 a 10 μg / ml.

　　

Escolha da concentração de trabalho de anticorpos enzimáticos: primeiro, titre a eficácia inicial com o método ELISA do kit de ELISA de células humanas diretas (veja a seção de anticorpos enzimáticos). Em seguida, fixar outras condições ou usar o "método quadrado" (revestimento, amostras de referência para amostras a serem testadas e anticorpos enzimáticos para diluição diferente) para titrar com precisão a concentração de trabalho em um sistema experimental formal.

　　

4, Substrato enzimático e seleção do doador de hidrogênio: a seleção do doador de hidrogênio exige um preço barato, seguro, colorido e incolor. Alguns fornecedores de hidrogênio (como OPD, etc.) têm efeitos potencialmente cancerígenos e devem ser protegidos. Se as condições o permitirem, fornecedores de hidrogênio não cancerígenos e altamente sensíveis, como TMB e ABTS, devem ser usados, que são atualmente fornecedores de hidrogênio mais satisfatórios. Após algum tempo de ação do sustrato, deve ser adicionado ácido forte ou álcali forte para terminar a reação. O tempo de ação do substrato deve ser de 10 a 30 minutos. A solução de substrato deve ser recém-formulada, especialmente com a adição de H2O2 antes do uso.