1.2.1Estrutura dos anticorpos

Os anticorpos são imunoglobulinas que se ligam à especificidade dos antígenos.(Imunoglobulina, Ig)。IgDividir em cinco categorias, ou seja,IgG、IgA、IgM、IgDeIgERelacionado com o teste imunológicoIgPrincipalmente paraIgGeIgM。Igcom duas cadeias leves (L(e duas cadeias pesadas)H(Composição singular).IgA cadeia leve é a mesma, háκ（kappa) eλ（Lambda(Dois tipos. Cinco categoriasIgA estrutura da cadeia pesada é diferente, o que determina que sua resistência também é diferente.IgGeIgMA cadeia pesada é chamadaγ（gamaCadeia eμ（Mu(Cadeia).

Cadeias pesadas e levesNA ordem de arranjo dos aminoácidos na extremidade varia de acordo com os anticorpos, chamados de regiões variáveis.VHeVLexibição. Ambos formam o local de ligação ao antígeno do anticorpo, que só coincide com o antígeno correspondente.A ligação específica, que ocorre, é a base estrutural da ligação específica de anticorpos ao antígeno.

IgGPode ser dividido em três seções por papaia protease, duas das quais são chamadas seções de ligação antígeno (Fab）。 CadaFabTodos mantêm a capacidade de se ligar ao antígeno, mas apenas umUm local de ligação ao antígeno é de valor unitário e não ocorre coagulação ou precipitação após a ligação ao antígeno. Outra seção dizFcSem atividade anticorpal, mas comIgG* Resistência.

IgGPode ser dividido em duas partes, umaFabDuplo corpo, chamadoF（ab'）2pode se ligar a dois antígenos idênticos; Outro fragmento semelhanteFcDepois foi descompostoPequenos péptidos moleculares, sem atividade biológica.

IgMÉ um pentómero composto por cinco monoméricos, incluindo 10uma cadeia pesada e10uma cadeia leve, com10O valor de ligação de um antígeno, devido à posição espacial, é expresso como apenas cinco valores de ligação de antígenos.IgMO peso molecular é aproximadamente900000，IgGO peso molecular é aproximadamente150000。

Depois que o organismo é infectado por micróbios,IgManticorpos e, em seguida, produzirIgGAnticorpos. Depois de algum tempo,IgMOs anticorpos diminuem e desaparecem gradualmente.IgGOs anticorpos podem permanecer a longo prazo e durar vários anos após a doença*Há muito tempo.

IgMOs anticorpos são geralmente imunes como anticorpos protetores. Portanto...IgMA determinação de anticorpos tem maior valor diagnóstico clínico para certas doenças infecciosas, como a hepatite A. A direita é a hepatite A.no soro do pacienteIgGanticorpos eIgMTempo e nível de presença dos anticorpos.

1.3Reação de anticorpos antígenos

1.3.1可逆性

O processo de ligação de antígenos e anticorpos para formar um complexo de anticorpos antígenos é um equilíbrio dinâmico, cuja fórmula de reação é:

Ag+AbAg·Ab

Afinidade dos anticorpos (afinidadeé a força de ligação intrínseca entre anticorpos antígenos, pode ser usada constante de equilíbrioKexibição:

K = [Ag·Ab]／[Ag] [Ab]

Ag·Abgrau de separação eKvalor relacionado. Os pontos de ligação do antígeno de anticorpos de alta afinidade e os agrupamentos de determinação do antígeno são perfeitamente adequados na configuração espacial, ambos se ligam firmemente e não são fáceis de separar. DesligaçãoOs antígenos ou anticorpos posteriores podem manter a estrutura e a atividade originais e, portanto, podem ser purificados por estratificação de afinidade. No anti-soro, específicoIgGOs anticorpos representam apenas o totalIgGmédioparte muito pequena. Os anticorpos específicos extraídos por estratificação de afinidade, conhecidos como anticorpos puros por estratificação de afinidade, podem ser aplicados para obter melhores resultados na imunologia.

1.3.2Proporção Zui

A quantidade de antígenos adicionados a quantidades crescentes de anticorpos para formar um complexo anticorpo (precipitação) é mostrada no gráfico1-4. A parte pico da curva é a faixa adequada de proporções de anticorpos de antígeno zui, chamada faixa equivalente (zona de equivalência）。 Antes e depois da faixa equivalente são a faixa excessiva de anticorpos e a faixa excessiva de antígenos, respectivamente. Se os antígenos ou anticorpos forem extremamente excessivos, nenhum sedimento se formará, em imunoassaysdenominado fenômeno (fenômeno zona）。 A sobredose de anticorpos é chamada cintura frontal (prezoneO excesso de antigênio é chamado de cintura posterior (pós-zona）。 Determinação da resistência por métodos imunológicosNo início, deve haver quantidade suficiente de anticorpos no sistema de reação, caso contrário, a quantidade medida será menor do que o conteúdo real e até mesmo falso negativo.

1.3.3Especificação

A ligação de anticorpos antígenos ocorre essencialmente apenas entre o agrupamento determinante de antígenos do antígeno e o local de ligação de antígenos do anticorpo. Como ambos são complementares na estrutura química e na configuração espacial, o antígenoA resposta dos anticorpos é altamente específica. Por exemplo, antígenos de superfície no vírus da hepatite B (HBsAg）、eantígeno (HBeAg(e anticorpos do núcleo)HBcAgde origem no mesmo vírus, mas se liga apenas aos seus anticorpos correspondentes e não aos outros doisReação. Essa especificidade da resposta de anticorpos antígenos permite que o imunoassay detecte uma substância específica em um composto proteico muito complexo, como soro, sem a necessidade de isolar primeiro o objeto a ser testado.。

Mas essa especificidade também não é. Se ambos os compostos tiverem a mesma estrutura parcialmente, uma reação cruzada pode ocorrer na reação de anticorpos antígenos. Por exemplo, a hormona gonadotropina (hCGHormônios produtores do corpo amarelo (LH(Todos porαeβDuas subunidades são formadas por diferentes estruturas.βsub-unidade e as duasαAs subunidades são semelhantes. UsarhCGImunidadeAntisoros de origem animal contêm anti-alfa-hCGResistênciaβ-hCGDois tipos de anticorposalfa-hCGOs anticorpos serãoLHno meio
αHá uma reação cruzada enzimática. Em ensaios clínicos, comohCGAnti-soro como um reagente de diagnóstico da gravidez para examinar a urinahCGSó pode ser usadohCGEnsaios de alta concentração, caso contrárioTraços de excreção fisiológica das mulheres na urinaLHhaverá uma reação cruzada. Assim, no diagnóstico precoce da gravidez (sensibilidade deve ser alcançada50 mIU/mlhCGNa prática é necessárioAplicação apenashCGresistência específica.β-hCGPara evitar reações cruzadas com outros hormônios.

1.3.4Sensibilidade

Para determinar o teor de uma substância no soro, a sensibilidade da comparação química éem mg/mlA sensibilidade da reação enzimática é de aproximadamente5 ~ 10μg / mlA sensibilidade do método de difusão de gel e turbididade na imunodeterminação é semelhante ao método de reação enzimática. Livre de marcaçãoA sensibilidade do teste pode ser milhares de vezes maior.g/mlNível. Por exemplo, com imunologia radiológica ou imunologia enzimáticaHBsAgSua sensibilidade atinge0,1 ng / ml。

1.4Aplicação da imunodeterminação em ensaios clínicos

Como vários componentes antígenicos, incluindo semi-antígenos de pequenas moléculas, podem ser usados ​​para preparar anticorpos anti-soros ou monoclonais específicos, este anticorpo pode ser usado como reagente para detectar o antígeno correspondente na amostra.Portanto, a aplicação da imunologia é extremamente ampla e pode ser usada em ensaios clínicos para determinar:

1）Várias proteínas nos líquidos corporais, incluindo proteínas muito pequenas, como a metafetoproteína.

2）Hormônios, incluindo esteroides de pequeno peso molecular.

3）Antibióticos e medicamentos.

4）antígenos patógenos,HBsAg、HBeAgEsperem.

5）Além disso, os antígenos purificados podem ser usados ​​para detectar anticorpos em amostras, como anti-HBsEsperem.

5Imunologia marcada

Como mencionado acima, a imunodeterminação é um método de determinação muito sensível, após a reação de anticorpos antígenos para determinar diretamente a precipitação ou turbidez formada, a sensibilidade pode ser alcançada.5 ~ 10μg / mlNo entanto, em ensaios clínicos, o teor de certos itens a testar na amostra está muito abaixo desse nível, por isso é importante procurar maneiras de aumentar a sensibilidade. O teste imunológico marcado éMarcar antígenos ou anticorpos nos reagentes de teste com substâncias que podem ser quantificadas para aumentar a sensibilidade através da determinação de marcadores. Em imunologia radiológica e imunologia enzimática, os marcadoresPara os radionúcleos e enzimas, o zui usa medições de radioatividade e vitalidade enzimática para calcular a quantidade de objectos a serem testados, com uma sensibilidade de centenas a milhares de vezes maior do que a medição direta de sedimentos. No teste imunológico marcado,Geralmente, um excesso de reagente de marcação é adicionado para garantir a reação com o objeto a ser testado*. marcação de anticorpos (Ab^※Detecção de antígenos)AgPor exemplo, a fórmula de reação é a seguinte:

Ag + Ab^※ AgAb^※+ Ab^※

No produto da reaçãoAgCombinadoAb^※livre eAb^※ Se os marcadores não forem separados, o resultado será a soma de ambos. Assim, a separação de marcadores livres e marcadores ligados é um passo importante na imunodeterminação de marcadores. aceitávelPor vários meios, o veículo de fase sólida é um deles. Se o antígeno ou anticorpo é embalado em um veículo de fase sólida e, em seguida, reage diretamente com o antígeno ou anticorpo marcado, o marcador ligado é fixado no veículo.No corpo, enquanto os marcadores livres permanecem na solução. Isso pode ser liberado através da lavagem.Ab^※Removendo, a determinação do marcador de ligação pode ser realizada em fase sólida.

6Imunologia enzimática

Imunologia enzimática (enzima imunoassay(Pode ser dividido em partes)homogênea(e não uniformes)heterogêneo(Dois tipos. Em médiaEIAMeioDetermine marcadores diretamente sem separação de marcadores separados e ligados. Por exemplo, sob certas condições, as enzimas formadas após a reação de anticorpos de antígeno marcam a perda de enzimas no complexo de anticorpos de antígenoA sua vitalidade sobre o substrato e, portanto, a vitalidade enzimática medida refletem diretamente os marcadores enzimáticos livres. uniformeEIAÉ menos utilizado em ensaios clínicos. Fase não uniformeEIAPrimeiro é necessário libertar eseparação de marcadores combinados. Como mencionado anteriormente, o veículo de fase sólida pode ser usado como um meio de separação. Este método de imunodeterminação é1971Quando Zui foi fundado no início, chamado de adsorbente imunológico ligado a enzimasDeterminação (ensaio imunosorbente ligado a enzimas) em resumo.ELISANo país, há tradução para ensaios de imunoassorção ligados a enzimas, embora o significado não seja exato, mas já foi usado.