Este kit deve ser usado apenas para pesquisa científica e não para diagnóstico médico.

Rato（Mouse）Fragmento do complemento do fator I 3b (iC3b)Kit de teste ELISA

Manual de instruções

Princípio de teste

O kit é usado com o teste de imunoassorção ligado à centrifase de um passo de corpo duplo Kàng (ELISA). Para a embalagem pré-embalada pelo fragmento do complemento do fator I 3b (iC3b) corpo de kàng embalado em microporos, em seguida, adicionar a amostra, o produto padrão, o corpo de kàng de teste marcado por HRP, depois de cultivo térmico e lavagem de chè. Colorado com o substrato TMB, o TMB é convertido em azul sob a catalisação da peroxidase e em amarelo final sob a ação do ácido. A clareza da cor foi positivamente correlacionada com o fragmento do complemento do fator I 3b (iC3b) na amostra. Calcule a concentração da amostra medindo a absorção (OD) a um comprimento de onda de 450 nm com um calibrador enzimático.

Métodos de recolha, tratamento e conservação de amostras

1. soro: usar tubos de ensaio sem termogênios e endotoxinas, evitar qualquer estímulo celular durante a operação, depois de coletar sangue, 3000 centrifugação para separar rapidamente e cuidadosamente o soro e os glóbulos vermelhos durante 10 minutos.

Plasma: EDTA, citrato ou hepatina anticoagulante. 3.000 rotações centrífugas durante 30 minutos.

Liquido supercelular: 3.000 rotações centrífugas durante 10 minutos para remover partículas e polímeros.

Homogenização do tecido: adicione o tecido a uma quantidade adequada de água salina fisiológica. 3.000 rotações centrífugas durante 10 minutos.

Conservação: se a amostra não for detectada em tempo útil após a coleta, por favor, divide-a em uma única dose, congele-a a -20 ° C, evite o descongelamento repetido, descongela-a a temperatura ambiente e certifique-se de que a amostra seja descongelada uniformemente e completamente.

Artigos próprios

Calificador enzimático (450 nm)

Amostrador de alta precisão e cabeça: 0,5-10uL, 2-20uL, 20-200uL, 200-1000uL

3. 37 ℃ termostato

Precauções operacionais

1. Mantenha o kit em 2-8 ° C, antes de usar o equilíbrio de temperatura ambiente por 20 minutos. O líquido de lavagem concentrado retirado do frigorífico terá cristalização, o que pertence ao fenômeno normal, o aquecimento do banho de água faz com que o cristal wán totalmente dissolvido depois de ser usado novamente.

As placas não utilizadas no experimento devem ser imediatamente colocadas de volta no saco autofechado e seladas (secadas a baixa temperatura).

O padrão S0 com concentração 0 pode ser considerado como controle negativo ou em branco; A amostra foi diluída 5 vezes quando operada de acordo com as instruções, e o resultado final é multiplicado por 5 para a concentração real da amostra.

4. Operação de aquecimento de acordo com o tempo, a quantidade e a ordem indicadas nas instruções.

Agite bem todos os componentes líquidos antes de usar.

Composição do Kit

Nota: as concentrações do produto padrão (S0-S5) são: 0, 12,5, 25, 50, 100, 200 ng/mL

Preparação dos Reagentes

20 x diluição do tampão de lavagem: a água destilada é diluída em 1: 20, ou seja, 1 porção de tampão de lavagem 20 x mais 19 porções de água destilada.

Método de lavagem

1. lavar a placa manualmente: jogar o líquido dentro do buraco, cada buraco encher o líquido de lavagem, colocar o líquido dentro do buraco após 1 minuto, secar no papel de absorção de água, assim lavar a placa 5 vezes.

Máquina de lavar placas automática: injete 350 μL de lavagem por orifício, mergulhe 1min, lave a placa 5 vezes.

Passos de operação

1. Remova a placa necessária do saco de folha de alumínio após o equilíbrio de temperatura ambiente de 20min, e a placa restante é colocada de volta a 4 ° C selada com um saco auto-fechado.

2. Defina o orificio padrão e o orificio da amostra, cada orificio padrão adiciona uma concentração diferente de 50μL do produto padrão;

3. O orifício da amostra adiciona primeiro 10 μL da amostra a ser testada e depois 40 μL da diluição da amostra; Nenhum buraco em branco.

4. Além do buraco em branco, o buraco padrão e o buraco da amostra adicionam 100 μL de corpo kàng de detecção marcado com a peroxidase de raiz (HRP) para cada buraco, selando o buraco de reação com uma membrana de vedação, uma panela de banho de água a 37 ° C ou uma caixa de termostato para 60 minutos.

5. Eliminar o líquido, secar no papel de absorção de água, preencher cada buraco com líquido de lavagem, deixar 1 min, descartar o líquido de lavagem, secar no papel de absorção de água, assim repetir a placa 5 vezes (também pode ser lavada com uma máquina de lavar placas).

Adicione 50 μL de substância A e B a cada poço e incube a luz a 37 ° C por 15 min.

Adicione 50 μL de líquido terminal a cada orifício, dentro de 15 min, para medir o valor de OD de cada orifício no comprimento de onda de 450 nm.

Resultado do julgamento

Desenhe uma curva padrão: na folha de cálculo do Excel, use a concentração padrão como coordenada transversal e o valor de OD como coordenada longitudinal, desenhe uma curva de regressão linear padrão e calcule os valores de concentração de amostra de acordo com a equação da curva.

Desempenho da caixa

Precisão: o valor R do coeficiente de regressão linear padrão com a concentração esperada, maior do que igual a 0,9900.

Sensibilidade: zuí baixa concentração de detecção inferior a 1,0 ng / mL.

Especificação: não se cruza com outros análogos estruturais solúveis.

Repetibilidade: coeficientes de variação dentro e entre placas são menores de 15%.

Armazenamento: 2-8 ° C, proteção contra a luz e a umidade.

6. Período de validade: 6 meses

Disclaimer de responsabilidade

Os kits são somente para uso de pesquisa e não devem ser usados ​​em experimentos clínicos ou em seres humanos, caso contrário, todas as consequências resultantes são assumidas pelo experimentador e a empresa não é responsável.

De acordo estritamente com as instruções, o experimentador viola as instruções de operação, e as consequências são assumidas pelo experimentador.