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O efeito do uso de instrumentos de detecção de peste suína africana depende em grande parte da normatividade da operação. Embora haja diferenças no processo operacional de diferentes tipos de instrumentos, o núcleo gira em torno de "processamento de amostras - operação de detecção - interpretação de resultados" três pontos centrais, cada passo de controle detalhado afeta diretamente a precisão dos resultados de detecção, operação novata precisa de especial atenção.

Preparação antes da utilização. Primeiro, verifique o estado do equipamento, confirme que a conexão de alimentação é estável, o buraco de dissipação não está bloqueado, o instrumento de PCR quantitativo de fluorescência precisa ser iniciado com antecedência por 30 minutos para garantir a estabilidade do sistema de controle de temperatura; O instrumento de detecção rápida de ouro colóide precisa colocar o equipamento e o reagente antecipadamente em ambiente de temperatura ambiente (20-25 ° C) para evitar que a temperatura abaixo afete o efeito da reação. Ao mesmo tempo, prepare ferramentas específicas de coleta de amostras, luvas descartáveis, etc., para proteger pessoalmente e prevenir a contaminação cruzada da amostra. A preparação do reagente deve seguir estritamente as instruções, o precursor, a sonda e outros reagentes congelados devem ser descongelados lentamente no banho de gelo e misturados suavemente após o descongelamento para evitar que a atividade do reagente seja danificada por choques fortes.

Tomando o principal instrumento de detecção de PCR quantitativa fluorescente como exemplo, as etapas operacionais principais podem ser divididas em quatro etapas. É a coleta e processamento de amostras, que é a base do teste. O tipo de amostra adequado deve ser selecionado de acordo com o propósito do teste, os suínos vivos preferem a coleta de anticoagulantes e os suínos mortos escolhem tecidos com alto teor de vírus, como baço e linfonodos. A amostra após a coleta é tratada com um lito especial para extrair o ácido nucleico através de centrifugação, adsorção, lavagem e outras etapas, o processo precisa controlar rigorosamente a velocidade de centrifugação (geralmente 12.000 r / min) e o tempo (3-5 minutos) para garantir a pureza da extração de ácido nucleico e evitar a interferência de impurezas como proteínas na detecção posterior.

O segundo passo é a formulação do sistema de reação, que é fundamental para garantir a precisão da detecção. No banco de operação estéril, o modelo de ácido nucleico extraído, o líquido de reação de PCR e o agente enzimático serão adicionados ao tubo de reação em proporção, a cada etapa deve usar um novo pipete para aspirar a cabeça para evitar a poluição cruzada. Após a conclusão da formulação do sistema, é necessário bater suavemente no fundo do tubo de reação para misturar o líquido e depois centrifugar por alguns segundos para eliminar a bolha, evitando que a bolha afete a captação do sinal fluorescente.

O terceiro passo é a detecção e configuração do programa. Coloque o tubo de reação no compartimento de amostra do instrumento, observando que o número corresponde corretamente às informações da amostra. De acordo com as instruções do reagente para definir o processo de teste, incluindo a fase de predisposição (95 ° C, 30 segundos), a deformação (95 ° C, 5 segundos), a extensão de cozimento (60 ° C, 30 segundos) e outros, o número de ciclos é geralmente de 40 vezes, ao mesmo tempo escolhendo o canal de fluorescência correspondente (como o canal FAM). Inicie a detecção após a configuração do programa, evitando o toque no instrumento durante o processo e evitando que o deslocamento da ranura da amostra cause falhas na detecção.

O quarto passo é a interpretação e registro dos resultados. Após o teste, o instrumento gerará automaticamente a curva de amplificação e o valor CT, e os critérios de julgamento devem seguir estritamente os requisitos do reagente: valor CT ≤ 37 e a curva de amplificação é típica "S" tipo positivo; CT > 37 ou sem curva de amplificação negativa; Se houver uma curva atípica, é necessário verificar novamente. Depois da conclusão da inspeção, os dados devem ser exportados oportunamente para fazer registros de informações de amostra, tempo de inspeção, estado do instrumento e outros, para facilitar o rastreamento posterior.

O instrumento de detecção rápida de ouro colóide é mais fácil de operar e é adequado para a triagem rápida da camada de substância. Após o tratamento da amostra, a quantidade apropriada de gotas de amostra é absorvida com uma aspiradora e adicionada ao orifício de amostragem da folha de ensaio, a quantidade de gotas é controlada em 3-4 gotas para evitar que a sobredose cause derramamento de líquido. Observação após 15-20 minutos de reposição: a linha de controle de qualidade e a linha de detecção mostram cor positiva ao mesmo tempo; Somente a linha de controle de qualidade é negativa; A coloração do cabo de controle sem qualidade indica que a detecção é inválida e precisa ser substituída para a nova detecção do papel de teste. Após a utilização, os cartões usados e os recipientes de amostras devem ser tratados de acordo com as especificações de resíduos médicos para evitar a propagação do vírus.