Método de utilização do kit de PCR quantitativo por fluorescência com sonda de cauda de porco:

A sensibilidade da determinação vem de enzimas como relatadas. Uma enzima é um catalisador orgânico em que uma pequena quantidade de enzima induz uma grande quantidade de reações catalíticas que produzem reações de coloração observadas. Portanto, este sistema é frequentemente chamado de sistema de amplificação enzimática.

Dilução do produto padrão: este kit fornece um produto padrão original, o usuário pode diluir em um pequeno tubo de ensaio de acordo com o gráfico abaixo. 24μg/ml Standard 5 150 μl de diluição standard original adicionado a 150 μl de diluição standard

12μg/ml Norma 4 para 150 μl Norma 5 para adição de 150 μl de diluição padrão

6 μg/ml Standard 3 Standard 4 de 150 μl Adiciona 150 μl de diluição standard

3 μg/ml Standard 2 Standard 3 de 150 μl Adiciona 150 μl de diluição standard

1,5 μg/ml Standard 1 Standard 2 de 150 μl Adiciona 150 μl de diluição standard

2. amostragem: furo em branco, furo padrão, furo de amostra a medir, respectivamente. Em um pacote enzimático, o padrão na placa é amostrado com precisão de 50 μl, e 40 μl de diluição da amostra é adicionado primeiro ao orifício da amostra a ser testada e, em seguida, 10 μl de diluição final da amostra a ser testada (5 vezes a diluição final da amostra). Coloque a amostra no fundo do orificio da placa de marcação enzimática, tente não tocar a parede do orificio e agite suavemente. |

3. Crescimento a temperatura: usar a placa de membrana de vedação após 37 ° C por 30 minutos.

4. Distribuição: diluir o líquido de lavagem concentrado 30 vezes com água destilada 30 vezes

5. lavagem: remover cuidadosamente a membrana de vedação, descartar o líquido, secar, encher cada buraco com líquido de lavagem, deixar em reposo 30 segundos depois de descartar, assim repetir 5 vezes e secar.

Adição de enzimas: Adicione 50 μl de reagente marcador enzimático a cada poço, exceto os poços em branco.

7. Criação térmica: operação e 3.

8. lavagem: operação com 5.

9. exibição de cor: cada buraco adicionar primeiro o agente A50μl, em seguida, adicionar o agente B50μl, agitar suavemente e misturar, 37 ° C para evitar a luz durante 15 minutos.

Terminação: adicionar 50 μl de líquido de terminação por orifício para terminar a reação (neste momento, o azul vira para amarelo).

Medição: medir a absorção fotográfica (OD) de cada orifício em sequência com ar condicionado em vazio zero e comprimento de onda de 450 nm. A determinação deve ser feita no prazo de 15 minutos após a adição do terminal.