Processo de operação do kit ELISA de mioglobina de rato (MYO/MB):

(1) Adicionar 100 μ1 de amostra a ser testada a cada buraco da amostra a ser testada, com 3 buracos paralelos para cada amostra; Configurar dois buracos de controle negativo, cada um sem tratamento

grupo de lysis celular de 100 μ1; Coloque um orifício de controle em branco e adicione 100 μ1 de lisote celular puro.

(2) A placa de marcação enzimática é colocada em 4 ° C e o pacote é mantido durante a noite.

(3) lavar a placa: absorver o líquido de reação dentro do orifício seco, lavar novamente com o líquido de lavagem (encher o líquido de lavagem após o orifício da placa, isto é, descartar), em seguida, encher a placa com o líquido de lavagem

Os buracos, mergulhar por 1-2 minutos, agitar com intervalos. Depois de descartar o líquido no buraco, esfregar no papel de absorção de água. Repita a lavagem 3-4 vezes.

(4) Adicionar 50 μ1 de PBS por orificio de controle negativo e 50 μ1 de líquido de trabalho de anticorpos imunes ao AIF diluído 1:500 por orificio de amostra e orificio em branco.

(5) Placa de marcação enzimática colocado dentro de uma caixa molhada de 37 ° C, incubar 60 min.

(6) lavar a placa, com (4).

(7) Adicione 1: 5000 diluído HRP-marcado de cabra anticorpos imunes líquido de trabalho de 100 μ1 por poço.

(8) Placa de marcação enzimática colocado dentro de uma caixa molhada de 37 ° C, incubar 60 min.

(9) lavar a placa, com (4).

(10) Adicione 100 μ1 de TMB para cada orifício, misture suavemente durante 10 segundos e coloque a reação no escuro a 37 ° C por 15-20 minutos.

(11) 100 μ12mo1/LH2S04 por orifício para terminar a reação.

(12) medir os valores de absorção de 450nm V1 e 630nm V2, respectivamente, o valor final medido 0D é a diferença entre os dois (V1-v2), para reduzir a quantidade de emissões no recipiente.

Interferência de luz causada por arranhões ou impressões digitais.

(13) Processamento de dados: O valor S/N é calculado após a obtenção dos valores OD da amostra (S) e do controle negativo (N). S/N>2.1 é o critério de determinação positivo.